CAJ | 학술논문

目的建立荧光实时定量RT-PCR(FQ-RT-PCR)检测前列腺癌(Pca)特异基因DD3 mRNA的方法.方法在DD3基因的外显子1和3之间设计一对引物和一条TaqMan-MGB探针,优化反应体系,建立DD3 mRNA的FQ-RT-PCR方法,并进行方法学评价.将PCR扩增产物经凝胶电泳纯化后与pBluescriptⅡSK载体连接,再将重组质粒转化感受态细胞进行克隆;提取重组质粒在紫外分光光度计上定量,作为定量检测的标准品.结果重组质粒经PCR扩增及序列测定,表明pBluescriptⅡSK-DD3cDNA克隆成功.PCR扩增产物经测序分析证实为DD3 mRNA特异性片段.本法灵敏度为6拷贝/反应,线性范围为6～6×108拷贝/反应,相关系数为0.9985,批内、批间变异系数分别为1.0%～2.0%和1.3%～6.6%.结论成功建立了FQ-RT-PCR检测DD3 mRNA的方法.为DD3 mRNA作为前列腺癌的诊断指标提供了方法学依据,也为其他肿瘤基因的检测提供了方法学启示.
목적 건립형광실시정량RT-PCR(FQ-RT-PCR)검측전렬선암(Pca)특이기인DD3 mRNA적방법.방법 재DD3기인적외현자1화3지간설계일대인물화일조TaqMan-MGB탐침,우화반응체계,건립DD3 mRNA적FQ-RT-PCR방법,병진행방법학평개.장PCR확증산물경응효전영순화후여pBluescriptⅡSK재체련접,재장중조질립전화감수태세포진행극륭;제취중조질립재자외분광광도계상정량,작위정량검측적표준품.결과 중조질립경PCR확증급서렬측정,표명pBluescriptⅡSK-DD3cDNA극륭성공.PCR확증산물경측서분석증실위DD3 mRNA특이성편단.본법령민도위6고패/반응,선성범위위6～6×108고패/반응,상관계수위0.9985,비내、비간변이계수분별위1.0%～2.0%화1.3%～6.6%.결론 성공건립료FQ-RT-PCR검측DD3 mRNA적방법.위DD3 mRNA작위전렬선암적진단지표제공료방법학의거,야위기타종류기인적검측제공료방법학계시.