西北农林科技大学学报（自然科学版）
西北農林科技大學學報（自然科學版）
서북농림과기대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NORTHWEST SCI-TECH UNIVERSITY OF AGRICULTURE AND FORESTRY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2007年
3期
75-80
,共6页
张娅%曾君祉%陈耀锋%黄华樑
張婭%曾君祉%陳耀鋒%黃華樑
장아%증군지%진요봉%황화량
转基因胡萝卜%口服疫苗%口蹄疫病毒VP1基因
轉基因鬍蘿蔔%口服疫苗%口蹄疫病毒VP1基因
전기인호라복%구복역묘%구제역병독VP1기인
为了生产一种可以直接口服的口蹄疫疫苗,以胡萝卜(Daucus carota L.var.sativa)无菌幼苗下胚轴诱导的愈伤组织为受体材料,通过农杆菌LBA4404介导的遗传转化,在CaMV双35S启动子的驱动下,将口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)结构蛋白VP1基因的活性肽片段(包括2个141～160位肽和1个200～213位肽的基因片段)导入胡萝卜愈伤组织细胞.经PCR和PCR-Southern杂交等方法鉴定转化苗,确认口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因已整合到胡萝卜染色体中,转化效率达到52%.SDS-PAGE试验结果初步证明,在转化苗总蛋白中有目的基因表达,胡萝卜种子中可溶性蛋白含量最高,达3.57 g/L,而根中可溶性蛋白含量最低,仅有0.17 g/L;靠近心叶的叶片可溶性蛋白含量可达到1.475 g/L,而最外部叶片可溶性蛋白含量仅有0.37 g/L,相差近5倍.Dot-ELISA和ELISA检测结果表明,转化苗中表达的口蹄疫病毒结构蛋白VP1可以与FMDV灭活疫苗免疫动物制备的抗体特异结合.以上试验结果证明,口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因在转基因胡萝卜中表达成功.
為瞭生產一種可以直接口服的口蹄疫疫苗,以鬍蘿蔔(Daucus carota L.var.sativa)無菌幼苗下胚軸誘導的愈傷組織為受體材料,通過農桿菌LBA4404介導的遺傳轉化,在CaMV雙35S啟動子的驅動下,將口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)結構蛋白VP1基因的活性肽片段(包括2箇141～160位肽和1箇200～213位肽的基因片段)導入鬍蘿蔔愈傷組織細胞.經PCR和PCR-Southern雜交等方法鑒定轉化苗,確認口蹄疫病毒結構蛋白VP1基因已整閤到鬍蘿蔔染色體中,轉化效率達到52%.SDS-PAGE試驗結果初步證明,在轉化苗總蛋白中有目的基因錶達,鬍蘿蔔種子中可溶性蛋白含量最高,達3.57 g/L,而根中可溶性蛋白含量最低,僅有0.17 g/L;靠近心葉的葉片可溶性蛋白含量可達到1.475 g/L,而最外部葉片可溶性蛋白含量僅有0.37 g/L,相差近5倍.Dot-ELISA和ELISA檢測結果錶明,轉化苗中錶達的口蹄疫病毒結構蛋白VP1可以與FMDV滅活疫苗免疫動物製備的抗體特異結閤.以上試驗結果證明,口蹄疫病毒結構蛋白VP1基因在轉基因鬍蘿蔔中錶達成功.
위료생산일충가이직접구복적구제역역묘,이호라복(Daucus carota L.var.sativa)무균유묘하배축유도적유상조직위수체재료,통과농간균LBA4404개도적유전전화,재CaMV쌍35S계동자적구동하,장구제역병독(foot-and-mouth disease virus,FMDV)결구단백VP1기인적활성태편단(포괄2개141～160위태화1개200～213위태적기인편단)도입호라복유상조직세포.경PCR화PCR-Southern잡교등방법감정전화묘,학인구제역병독결구단백VP1기인이정합도호라복염색체중,전화효솔체도52%.SDS-PAGE시험결과초보증명,재전화묘총단백중유목적기인표체,호라복충자중가용성단백함량최고,체3.57 g/L,이근중가용성단백함량최저,부유0.17 g/L;고근심협적협편가용성단백함량가체도1.475 g/L,이최외부협편가용성단백함량부유0.37 g/L,상차근5배.Dot-ELISA화ELISA검측결과표명,전화묘중표체적구제역병독결구단백VP1가이여FMDV멸활역묘면역동물제비적항체특이결합.이상시험결과증명,구제역병독결구단백VP1기인재전기인호라복중표체성공.
