河南农业大学学报
河南農業大學學報
하남농업대학학보
ACTA AGRICULTURAE UNIVERSITATIS HENANENSIS
2007年
4期
409-413
,共5页
李晓晖%徐珠洁%梁胜华%蒋欣茵%任大明
李曉暉%徐珠潔%樑勝華%蔣訢茵%任大明
리효휘%서주길%량성화%장흔인%임대명
大肠杆菌%嘌呤核苷磷酸化酶%pBV 220%肌苷%腺苷
大腸桿菌%嘌呤覈苷燐痠化酶%pBV 220%肌苷%腺苷
대장간균%표령핵감린산화매%pBV 220%기감%선감
通过双酶切方法将重组质粒上大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)基因克隆到pBV220表达载体上,构建了温敏型PNPase的表达载体pBV 220-PNP,转化大肠杆菌DH5α并使之表达.SDS-PAGE电泳结果显示出明显的特异表达条带,其分子量约为26 kDa.在此基础上研究了不同诱导条件对蛋白表达量的影响.分别以肌苷和尿苷为核糖供体研究重组菌转化腺苷的条件,发现肌苷最适合作为核糖供体,在30 mmol·L-1 pH 7.5的Na2HPO4-KH2PO4缓冲液中,以30 mmol·L-1肌苷和10 mmol·L-1腺嘌呤作底物,加入0.5% 基因工程湿菌体60 ℃反应3 h,腺苷的转化率为85.57%.
通過雙酶切方法將重組質粒上大腸桿菌嘌呤覈苷燐痠化酶(PNPase)基因剋隆到pBV220錶達載體上,構建瞭溫敏型PNPase的錶達載體pBV 220-PNP,轉化大腸桿菌DH5α併使之錶達.SDS-PAGE電泳結果顯示齣明顯的特異錶達條帶,其分子量約為26 kDa.在此基礎上研究瞭不同誘導條件對蛋白錶達量的影響.分彆以肌苷和尿苷為覈糖供體研究重組菌轉化腺苷的條件,髮現肌苷最適閤作為覈糖供體,在30 mmol·L-1 pH 7.5的Na2HPO4-KH2PO4緩遲液中,以30 mmol·L-1肌苷和10 mmol·L-1腺嘌呤作底物,加入0.5% 基因工程濕菌體60 ℃反應3 h,腺苷的轉化率為85.57%.
통과쌍매절방법장중조질립상대장간균표령핵감린산화매(PNPase)기인극륭도pBV220표체재체상,구건료온민형PNPase적표체재체pBV 220-PNP,전화대장간균DH5α병사지표체.SDS-PAGE전영결과현시출명현적특이표체조대,기분자량약위26 kDa.재차기출상연구료불동유도조건대단백표체량적영향.분별이기감화뇨감위핵당공체연구중조균전화선감적조건,발현기감최괄합작위핵당공체,재30 mmol·L-1 pH 7.5적Na2HPO4-KH2PO4완충액중,이30 mmol·L-1기감화10 mmol·L-1선표령작저물,가입0.5% 기인공정습균체60 ℃반응3 h,선감적전화솔위85.57%.
