广西医科大学学报
廣西醫科大學學報
엄서의과대학학보
JOURNAL OF GUANGXI MEDICAL UNIVERSITY
2009年
3期
392-394
,共3页
caveolin-1%PEGFP-N1载体%真核表达载体
caveolin-1%PEGFP-N1載體%真覈錶達載體
caveolin-1%PEGFP-N1재체%진핵표체재체
目的:克隆caveolin-1(CAV1)基因开放阅读框的cDNA序列,构建PEGFP-N1/CAV1的真核表达载体.方法:设计并合成带酶切位点及保护碱基的引物,RT-PCR法扩增caveolin-1基因,PEGFP-N1载体及caveolin-1基因片段进行限制性双酶切,电泳后回收切开的PEGFP-N1 及caveolin-1片段,经连接反应后构建PEGFP-N1/CAV1真核表达载体.结果:PEGFP-N1/CAV1重组质粒经PCR电泳结果显示,得到一条在555 bp的片段;重组质粒经限制性内酶切双酶切电泳结果证实,可释放一条在555 bp的片段和4.8 kbp的载体片段;重组质粒测序结果,经BLAST比对,100%符合;瞬时转染宫颈癌Hela细胞48 h荧光显微镜及实时荧光定量PCR证实重组质粒在宫颈癌Hela中得到表达.结论:成功构建了同时携带有绿色荧光蛋白及G418筛选位点的PEGFP-N1/CAV1真核表达载体复合体.
目的:剋隆caveolin-1(CAV1)基因開放閱讀框的cDNA序列,構建PEGFP-N1/CAV1的真覈錶達載體.方法:設計併閤成帶酶切位點及保護堿基的引物,RT-PCR法擴增caveolin-1基因,PEGFP-N1載體及caveolin-1基因片段進行限製性雙酶切,電泳後迴收切開的PEGFP-N1 及caveolin-1片段,經連接反應後構建PEGFP-N1/CAV1真覈錶達載體.結果:PEGFP-N1/CAV1重組質粒經PCR電泳結果顯示,得到一條在555 bp的片段;重組質粒經限製性內酶切雙酶切電泳結果證實,可釋放一條在555 bp的片段和4.8 kbp的載體片段;重組質粒測序結果,經BLAST比對,100%符閤;瞬時轉染宮頸癌Hela細胞48 h熒光顯微鏡及實時熒光定量PCR證實重組質粒在宮頸癌Hela中得到錶達.結論:成功構建瞭同時攜帶有綠色熒光蛋白及G418篩選位點的PEGFP-N1/CAV1真覈錶達載體複閤體.
목적:극륭caveolin-1(CAV1)기인개방열독광적cDNA서렬,구건PEGFP-N1/CAV1적진핵표체재체.방법:설계병합성대매절위점급보호감기적인물,RT-PCR법확증caveolin-1기인,PEGFP-N1재체급caveolin-1기인편단진행한제성쌍매절,전영후회수절개적PEGFP-N1 급caveolin-1편단,경련접반응후구건PEGFP-N1/CAV1진핵표체재체.결과:PEGFP-N1/CAV1중조질립경PCR전영결과현시,득도일조재555 bp적편단;중조질립경한제성내매절쌍매절전영결과증실,가석방일조재555 bp적편단화4.8 kbp적재체편단;중조질립측서결과,경BLAST비대,100%부합;순시전염궁경암Hela세포48 h형광현미경급실시형광정량PCR증실중조질립재궁경암Hela중득도표체.결론:성공구건료동시휴대유록색형광단백급G418사선위점적PEGFP-N1/CAV1진핵표체재체복합체.
