中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2008年
1期
24-28
,共5页
李桂军%桂静%肖美英%楼永良
李桂軍%桂靜%肖美英%樓永良
리계군%계정%초미영%루영량
创伤弧菌溶细胞素%E.coli表达%溶血活性%应激因子
創傷弧菌溶細胞素%E.coli錶達%溶血活性%應激因子
창상호균용세포소%E.coli표체%용혈활성%응격인자
目的 用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素,对其溶血活性进行评价.并观察其作用肝癌细胞SMMC7721后,调控肝癌细胞SMMC7721应激因子基因表达情况.方法 构建pET28a(+)-whA表达载体,对包涵体进行三步洗涤后,用金属亲和层析(6×His Tag)纯化重组创伤弧菌溶细胞素(rVVC),并用溶血试验验证重组蛋白活性.复性重组蛋白作用肝癌细胞SMMC7721后,RT-PCR方法 检验SMMC7721细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、热休克蛋白90(HSP90)基因分泌调节情况.结果 用基因工程的方法 成功获得高表达、高纯度(纯度≥96%)rVVC.兔红细胞溶血试验检测表明,rVVC具有溶血活性,其活性为0.2 μg/HU(溶血单位).RT-PCR结果显示,rVVC能明显诱导肝癌细胞SMMC7721的TNF-α、HSP90 mRNA表达能力,但具有时间、剂量依赖性.结论 表达、纯化并复性的rVVC能明显诱导肝癌细胞SMMC7721的TNF-α、HSP90 mRNA表达.提示rVVC在组织细胞损伤过程中发挥了应激作用.
目的 用大腸桿菌錶達繫統錶達創傷弧菌溶細胞素,對其溶血活性進行評價.併觀察其作用肝癌細胞SMMC7721後,調控肝癌細胞SMMC7721應激因子基因錶達情況.方法 構建pET28a(+)-whA錶達載體,對包涵體進行三步洗滌後,用金屬親和層析(6×His Tag)純化重組創傷弧菌溶細胞素(rVVC),併用溶血試驗驗證重組蛋白活性.複性重組蛋白作用肝癌細胞SMMC7721後,RT-PCR方法 檢驗SMMC7721細胞腫瘤壞死因子α(TNF-α)、熱休剋蛋白90(HSP90)基因分泌調節情況.結果 用基因工程的方法 成功穫得高錶達、高純度(純度≥96%)rVVC.兔紅細胞溶血試驗檢測錶明,rVVC具有溶血活性,其活性為0.2 μg/HU(溶血單位).RT-PCR結果顯示,rVVC能明顯誘導肝癌細胞SMMC7721的TNF-α、HSP90 mRNA錶達能力,但具有時間、劑量依賴性.結論 錶達、純化併複性的rVVC能明顯誘導肝癌細胞SMMC7721的TNF-α、HSP90 mRNA錶達.提示rVVC在組織細胞損傷過程中髮揮瞭應激作用.
목적 용대장간균표체계통표체창상호균용세포소,대기용혈활성진행평개.병관찰기작용간암세포SMMC7721후,조공간암세포SMMC7721응격인자기인표체정황.방법 구건pET28a(+)-whA표체재체,대포함체진행삼보세조후,용금속친화층석(6×His Tag)순화중조창상호균용세포소(rVVC),병용용혈시험험증중조단백활성.복성중조단백작용간암세포SMMC7721후,RT-PCR방법 검험SMMC7721세포종류배사인자α(TNF-α)、열휴극단백90(HSP90)기인분비조절정황.결과 용기인공정적방법 성공획득고표체、고순도(순도≥96%)rVVC.토홍세포용혈시험검측표명,rVVC구유용혈활성,기활성위0.2 μg/HU(용혈단위).RT-PCR결과현시,rVVC능명현유도간암세포SMMC7721적TNF-α、HSP90 mRNA표체능력,단구유시간、제량의뢰성.결론 표체、순화병복성적rVVC능명현유도간암세포SMMC7721적TNF-α、HSP90 mRNA표체.제시rVVC재조직세포손상과정중발휘료응격작용.
