吉林医学
吉林醫學
길림의학
JILIN MEDICAL JOURANL
2005年
2期
136-138
,共3页
徐寿水%徐冬梅%赵文阁%金丽
徐壽水%徐鼕梅%趙文閣%金麗
서수수%서동매%조문각%금려
基因克隆%抑癌基因PTEN%抑制,肿瘤%表达载体
基因剋隆%抑癌基因PTEN%抑製,腫瘤%錶達載體
기인극륭%억암기인PTEN%억제,종류%표체재체
目的:克隆人野生型和突变型PIEN的cDNA,并构建其表达载体,探讨其表达质粒在人胶质瘤U251细胞中的表达情况.方法:分别从新鲜胎盘组织和结肠癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增人野生型和突变型PTEN基因全长cDNA,分别克隆人pMD 18-T载体上,经PCR、酶切鉴定均为阳性的克隆,进行核苷酸序列分析,再分别将两段基因定向克隆入pcDNA3.1(+)载体中构建表达载体.结果:反转录PCR扩增后的产物,在约1.4kb处出现明亮的特异性条带,pcDNA-PTEN-WT细胞的生长曲线生长速度较另3种细胞明显减慢.结论:转染入U251细胞,发现突变型PTEN蛋白对细胞生长无明显抑制作用,而野生型PTEN蛋白对细胞生长有明显抑制作用.
目的:剋隆人野生型和突變型PIEN的cDNA,併構建其錶達載體,探討其錶達質粒在人膠質瘤U251細胞中的錶達情況.方法:分彆從新鮮胎盤組織和結腸癌組織中提取總RNA,採用RT-PCR的方法擴增人野生型和突變型PTEN基因全長cDNA,分彆剋隆人pMD 18-T載體上,經PCR、酶切鑒定均為暘性的剋隆,進行覈苷痠序列分析,再分彆將兩段基因定嚮剋隆入pcDNA3.1(+)載體中構建錶達載體.結果:反轉錄PCR擴增後的產物,在約1.4kb處齣現明亮的特異性條帶,pcDNA-PTEN-WT細胞的生長麯線生長速度較另3種細胞明顯減慢.結論:轉染入U251細胞,髮現突變型PTEN蛋白對細胞生長無明顯抑製作用,而野生型PTEN蛋白對細胞生長有明顯抑製作用.
목적:극륭인야생형화돌변형PIEN적cDNA,병구건기표체재체,탐토기표체질립재인효질류U251세포중적표체정황.방법:분별종신선태반조직화결장암조직중제취총RNA,채용RT-PCR적방법확증인야생형화돌변형PTEN기인전장cDNA,분별극륭인pMD 18-T재체상,경PCR、매절감정균위양성적극륭,진행핵감산서렬분석,재분별장량단기인정향극륭입pcDNA3.1(+)재체중구건표체재체.결과:반전록PCR확증후적산물,재약1.4kb처출현명량적특이성조대,pcDNA-PTEN-WT세포적생장곡선생장속도교령3충세포명현감만.결론:전염입U251세포,발현돌변형PTEN단백대세포생장무명현억제작용,이야생형PTEN단백대세포생장유명현억제작용.
