免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2005年
2期
142-144,147
,共4页
许元生%熊冬生%肖瑛%范冬梅%王金宏%杨纯正
許元生%熊鼕生%肖瑛%範鼕梅%王金宏%楊純正
허원생%웅동생%초영%범동매%왕금굉%양순정
疏水层析%凝胶过滤%F(ab')2
疏水層析%凝膠過濾%F(ab')2
소수층석%응효과려%F(ab')2
目的比较疏水层析和凝胶过滤两种方法分离纯化HI47抗CD20 F(ab')2的优缺点.方法采用亲和层析柱protein-G对发酵菌体裂解液进行粗纯化,分别采用疏水层析法和凝胶过滤法进行抗CD20 F(ab')2的分离纯化:疏水层析采用梯度洗脱,80%B液洗脱20min,100%B液洗脱30 min;凝胶过滤以50mmol/L PB缓冲液(pH 7.0),0.8 mL/min洗脱4 h.结果粗纯化产物主要含F(ab')2、Fab',含量分别为19.6%、59.7%.采用疏水层析法1 h即可完成分离,F(ab')2回收率为67%,纯度为89.3%;凝胶过滤4 h完成分离,F(ab')2回收率为65%,纯度为90.5%.FACS结果表明,两者结合Raji细胞的阳性率分别为99.93%和99.97%.结论疏水层析分离纯化抗CD20 F(ab')2简单、快速、回收率高、纯度高,适用于大规模的工业化生产.
目的比較疏水層析和凝膠過濾兩種方法分離純化HI47抗CD20 F(ab')2的優缺點.方法採用親和層析柱protein-G對髮酵菌體裂解液進行粗純化,分彆採用疏水層析法和凝膠過濾法進行抗CD20 F(ab')2的分離純化:疏水層析採用梯度洗脫,80%B液洗脫20min,100%B液洗脫30 min;凝膠過濾以50mmol/L PB緩遲液(pH 7.0),0.8 mL/min洗脫4 h.結果粗純化產物主要含F(ab')2、Fab',含量分彆為19.6%、59.7%.採用疏水層析法1 h即可完成分離,F(ab')2迴收率為67%,純度為89.3%;凝膠過濾4 h完成分離,F(ab')2迴收率為65%,純度為90.5%.FACS結果錶明,兩者結閤Raji細胞的暘性率分彆為99.93%和99.97%.結論疏水層析分離純化抗CD20 F(ab')2簡單、快速、迴收率高、純度高,適用于大規模的工業化生產.
목적비교소수층석화응효과려량충방법분리순화HI47항CD20 F(ab')2적우결점.방법채용친화층석주protein-G대발효균체렬해액진행조순화,분별채용소수층석법화응효과려법진행항CD20 F(ab')2적분리순화:소수층석채용제도세탈,80%B액세탈20min,100%B액세탈30 min;응효과려이50mmol/L PB완충액(pH 7.0),0.8 mL/min세탈4 h.결과조순화산물주요함F(ab')2、Fab',함량분별위19.6%、59.7%.채용소수층석법1 h즉가완성분리,F(ab')2회수솔위67%,순도위89.3%;응효과려4 h완성분리,F(ab')2회수솔위65%,순도위90.5%.FACS결과표명,량자결합Raji세포적양성솔분별위99.93%화99.97%.결론소수층석분리순화항CD20 F(ab')2간단、쾌속、회수솔고、순도고,괄용우대규모적공업화생산.
