中华男科学杂志
中華男科學雜誌
중화남과학잡지
NATIONAL JOURNAL OF ANDROLOGY
2005年
2期
106-111
,共6页
沈肖方%李建远%王海燕%薛江南%曹奇志%连培文%陈辉%解美娜
瀋肖方%李建遠%王海燕%薛江南%曹奇誌%連培文%陳輝%解美娜
침초방%리건원%왕해연%설강남%조기지%련배문%진휘%해미나
附睾%ESC42%重组%大肠埃希菌%生物学鉴定%人类
附睪%ESC42%重組%大腸埃希菌%生物學鑒定%人類
부고%ESC42%중조%대장애희균%생물학감정%인류
目的:利用基因工程技术合成出人附睾特异表达基因ESC42重组蛋白,为其功能研究提供材料.方法:从人附睾cDNA文库扩增出ESC42基因片段,构建原核表达载体,进行克隆、表达、蛋白质纯化及单克隆抗体制备;Western印迹鉴定纯化产物及其单克隆抗体的特异性;基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定ESC42蛋白相对分子质量(Mr)和肽质量指纹,用MS-Fit软件查询NCBI数据库.结果:获得rhESC42融合蛋白纯度为99%;Mr为11978.12,制备出抗rhESC42单克隆抗体;质谱分析的数据覆盖了所预测氨基酸序列的48%,且符合率为100%.在Expasy数据库中进行结构域扫描,发现ESC42属于β-defensin家族,具有抗菌活性.结论:获得了高纯度且具有生物效应的rhESC42重组蛋白质,并从蛋白质水平对预测氨基酸序列进行了证实,为以后的功能研究奠定基础.
目的:利用基因工程技術閤成齣人附睪特異錶達基因ESC42重組蛋白,為其功能研究提供材料.方法:從人附睪cDNA文庫擴增齣ESC42基因片段,構建原覈錶達載體,進行剋隆、錶達、蛋白質純化及單剋隆抗體製備;Western印跡鑒定純化產物及其單剋隆抗體的特異性;基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)鑒定ESC42蛋白相對分子質量(Mr)和肽質量指紋,用MS-Fit軟件查詢NCBI數據庫.結果:穫得rhESC42融閤蛋白純度為99%;Mr為11978.12,製備齣抗rhESC42單剋隆抗體;質譜分析的數據覆蓋瞭所預測氨基痠序列的48%,且符閤率為100%.在Expasy數據庫中進行結構域掃描,髮現ESC42屬于β-defensin傢族,具有抗菌活性.結論:穫得瞭高純度且具有生物效應的rhESC42重組蛋白質,併從蛋白質水平對預測氨基痠序列進行瞭證實,為以後的功能研究奠定基礎.
목적:이용기인공정기술합성출인부고특이표체기인ESC42중조단백,위기공능연구제공재료.방법:종인부고cDNA문고확증출ESC42기인편단,구건원핵표체재체,진행극륭、표체、단백질순화급단극륭항체제비;Western인적감정순화산물급기단극륭항체적특이성;기질보조격광해흡전리-비행시간질보(MALDI-TOF-MS)감정ESC42단백상대분자질량(Mr)화태질량지문,용MS-Fit연건사순NCBI수거고.결과:획득rhESC42융합단백순도위99%;Mr위11978.12,제비출항rhESC42단극륭항체;질보분석적수거복개료소예측안기산서렬적48%,차부합솔위100%.재Expasy수거고중진행결구역소묘,발현ESC42속우β-defensin가족,구유항균활성.결론:획득료고순도차구유생물효응적rhESC42중조단백질,병종단백질수평대예측안기산서렬진행료증실,위이후적공능연구전정기출.
