CAJ | 학술논문

目的: 构建携带绿色荧光蛋白的TNFα-Tumstatin融合基因腺病毒表达载体,转染人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs).方法: 设计含有GM-CSF信号肽序列和BglⅡ及HindⅢ酶切位点的引物,PCR扩增TNFα-Tumstatin,将扩增产物亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后转化含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中同源重组.筛选获得含有融合基因的重组腺病毒质粒,酶切鉴定并测序.重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞,经过包装、扩增后感染hUCMSCs并检测细胞内融合基因的表达.结果: 重组腺病毒质粒经PCR和PacⅠ酶切鉴定,证实含有TNFα-Tumstatin融合基因,测序结果和设计片段的序列一致.重组腺病毒感染的hUCMSCs表达绿色荧光蛋白和融合基因.结论: 成功构建了TNFα-Tumstatin融合基因的腺病毒表达载体,能高效率感染hUCMSCs,为进一步研究融合基因修饰的hUCMSCs抗肿瘤效应奠定了基础.
목적: 구건휴대록색형광단백적TNFα-Tumstatin융합기인선병독표체재체,전염인제대간질간세포(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs).방법: 설계함유GM-CSF신호태서렬화BglⅡ급HindⅢ매절위점적인물,PCR확증TNFα-Tumstatin,장확증산물아극륭도천사질립pAdTrack-CMV상,중조천사질립경PmeⅠ선성화후전화함유선병독골가질립pAdEasy-1적BJ5183중동원중조.사선획득함유융합기인적중조선병독질립,매절감정병측서.중조병독질립용PacⅠ매절선성화후전염293A세포,경과포장、확증후감염hUCMSCs병검측세포내융합기인적표체.결과: 중조선병독질립경PCR화PacⅠ매절감정,증실함유TNFα-Tumstatin융합기인,측서결과화설계편단적서렬일치.중조선병독감염적hUCMSCs표체록색형광단백화융합기인.결론: 성공구건료TNFα-Tumstatin융합기인적선병독표체재체,능고효솔감염hUCMSCs,위진일보연구융합기인수식적hUCMSCs항종류효응전정료기출.