生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
12期
2093-2097
,共5页
李湘鸣%罗方妮%汪霄%贾平%张娟%祝娉婷%张惟立
李湘鳴%囉方妮%汪霄%賈平%張娟%祝娉婷%張惟立
리상명%라방니%왕소%가평%장연%축빙정%장유립
环境雌激素%酵母细胞%雌激素受体%绿色荧光蛋白%高通量测评
環境雌激素%酵母細胞%雌激素受體%綠色熒光蛋白%高通量測評
배경자격소%효모세포%자격소수체%록색형광단백%고통량측평
以载体双表达的方式构建重组酵母环境雌激素的评价体系,用于快速筛选雌激素类化合物.在表达载体中,用3-磷酸甘油醛脱氢酶(GPD)启动子驱动α人雌激素受体基因(hERα)的表达;在报告载体中,用雌激素效应元件(ERE)调控的绿色荧光蛋白(yEGFP)作为报告基因.将两者转化于酵母细胞(W303-1A)中,构建成重组绿色荧光蛋白酵母细胞.该酵母细胞经不同浓度的雌激素类化合物作用后,发现GFP的表达量与此类受试物具有明显的剂量效应关系.与其他环境雌激素酵母评价体系相比,该重组酵母评价细胞,在应用时不需要破坏细胞壁,也不需要底物和相关试剂,可直接在96孔板中操作完成,具有快速,高通量、敏感性高、重现性好及廉价等特点.
以載體雙錶達的方式構建重組酵母環境雌激素的評價體繫,用于快速篩選雌激素類化閤物.在錶達載體中,用3-燐痠甘油醛脫氫酶(GPD)啟動子驅動α人雌激素受體基因(hERα)的錶達;在報告載體中,用雌激素效應元件(ERE)調控的綠色熒光蛋白(yEGFP)作為報告基因.將兩者轉化于酵母細胞(W303-1A)中,構建成重組綠色熒光蛋白酵母細胞.該酵母細胞經不同濃度的雌激素類化閤物作用後,髮現GFP的錶達量與此類受試物具有明顯的劑量效應關繫.與其他環境雌激素酵母評價體繫相比,該重組酵母評價細胞,在應用時不需要破壞細胞壁,也不需要底物和相關試劑,可直接在96孔闆中操作完成,具有快速,高通量、敏感性高、重現性好及廉價等特點.
이재체쌍표체적방식구건중조효모배경자격소적평개체계,용우쾌속사선자격소류화합물.재표체재체중,용3-린산감유철탈경매(GPD)계동자구동α인자격소수체기인(hERα)적표체;재보고재체중,용자격소효응원건(ERE)조공적록색형광단백(yEGFP)작위보고기인.장량자전화우효모세포(W303-1A)중,구건성중조록색형광단백효모세포.해효모세포경불동농도적자격소류화합물작용후,발현GFP적표체량여차류수시물구유명현적제량효응관계.여기타배경자격소효모평개체계상비,해중조효모평개세포,재응용시불수요파배세포벽,야불수요저물화상관시제,가직접재96공판중조작완성,구유쾌속,고통량、민감성고、중현성호급렴개등특점.
