南京农业大学学报
南京農業大學學報
남경농업대학학보
JOURNAL OF NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY
2011年
3期
55-60
,共6页
王卫%豆献英%李德青%张正光
王衛%豆獻英%李德青%張正光
왕위%두헌영%리덕청%장정광
激发子%过敏性细胞死亡%病毒诱导基因沉默
激髮子%過敏性細胞死亡%病毒誘導基因沉默
격발자%과민성세포사망%병독유도기인침묵
采用病毒诱导基因沉默技术从本氏烟(Nicotiana benthamiana)cDNA文库中筛选受3种不同激发子(Nep1、harpin和INF1)诱导的过敏性细胞死亡的调控基因.以农杆菌Gv3101为宿主、利用PVX病毒表达载体构建了含有7 000个单克隆的本氏烟cDNA文库,采用牙签刺伤法和注射接种法,从6 000个克隆中筛选到了34个能使激发子诱发的过敏性细胞死亡表型发生改变的克隆.对上述阳性克隆进行序列测定和分析,发现其中13个与已知的基因具有较高的同源性,其中克隆Nb14-4编码1个特异的ALY蛋白;克隆Nb3-9和Nb4-26分别编码1个苹果酸脱氢酶和果糖二磷酸醛缩酶;Nb4-28编码普通烟草中的14-3-3 d-2蛋白.还有21个克隆在公共数据库中没有同源基因.上述结果表明:利用病毒表达载体建立cDNA文库,并采用病毒诱导基因沉默技术可从烟草全基因组内筛选受不同激发子诱导的过敏性细胞死亡的调控基因,为揭示植物过敏性细胞死亡分子机制提供试验依据.
採用病毒誘導基因沉默技術從本氏煙(Nicotiana benthamiana)cDNA文庫中篩選受3種不同激髮子(Nep1、harpin和INF1)誘導的過敏性細胞死亡的調控基因.以農桿菌Gv3101為宿主、利用PVX病毒錶達載體構建瞭含有7 000箇單剋隆的本氏煙cDNA文庫,採用牙籤刺傷法和註射接種法,從6 000箇剋隆中篩選到瞭34箇能使激髮子誘髮的過敏性細胞死亡錶型髮生改變的剋隆.對上述暘性剋隆進行序列測定和分析,髮現其中13箇與已知的基因具有較高的同源性,其中剋隆Nb14-4編碼1箇特異的ALY蛋白;剋隆Nb3-9和Nb4-26分彆編碼1箇蘋果痠脫氫酶和果糖二燐痠醛縮酶;Nb4-28編碼普通煙草中的14-3-3 d-2蛋白.還有21箇剋隆在公共數據庫中沒有同源基因.上述結果錶明:利用病毒錶達載體建立cDNA文庫,併採用病毒誘導基因沉默技術可從煙草全基因組內篩選受不同激髮子誘導的過敏性細胞死亡的調控基因,為揭示植物過敏性細胞死亡分子機製提供試驗依據.
채용병독유도기인침묵기술종본씨연(Nicotiana benthamiana)cDNA문고중사선수3충불동격발자(Nep1、harpin화INF1)유도적과민성세포사망적조공기인.이농간균Gv3101위숙주、이용PVX병독표체재체구건료함유7 000개단극륭적본씨연cDNA문고,채용아첨자상법화주사접충법,종6 000개극륭중사선도료34개능사격발자유발적과민성세포사망표형발생개변적극륭.대상술양성극륭진행서렬측정화분석,발현기중13개여이지적기인구유교고적동원성,기중극륭Nb14-4편마1개특이적ALY단백;극륭Nb3-9화Nb4-26분별편마1개평과산탈경매화과당이린산철축매;Nb4-28편마보통연초중적14-3-3 d-2단백.환유21개극륭재공공수거고중몰유동원기인.상술결과표명:이용병독표체재체건립cDNA문고,병채용병독유도기인침묵기술가종연초전기인조내사선수불동격발자유도적과민성세포사망적조공기인,위게시식물과민성세포사망분자궤제제공시험의거.
