质谱学报
質譜學報
질보학보
2011年
4期
193-199
,共7页
周大炜%刘斌%吴俊丽%胡波%齐源远
週大煒%劉斌%吳俊麗%鬍波%齊源遠
주대위%류빈%오준려%호파%제원원
脂寡糖%糖基转移酶%基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱( MALDI-TOF MS)
脂寡糖%糖基轉移酶%基質輔助激光解吸離子化-飛行時間質譜( MALDI-TOF MS)
지과당%당기전이매%기질보조격광해흡리자화-비행시간질보( MALDI-TOF MS)
以wabD(大肠杆菌O77中O抗原基因簇内)编码的α-1,3-甘露糖转移酶、wfgD(大肠杆菌O152中O抗原基因簇内)编码的β-1,3-葡萄糖转移酶和ωfeD(志贺氏菌鲍氏O14中O抗原基因簇内)编码的β-1,4-半乳糖基转移酶酶促反应产物为研究对象,尝试应用碰撞诱导解离(CID)负离子模式基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术建立简单、高效的糖基转移酶监测方法.该方法首先直接用质谱分析0.3μL未经色谱分离、除盐处理的反应混合物,随后应用CID串联质谱技术对酶活反应产物进行结构表征,实现酶活反应的快速检测.研究结果表明,CIDMALDI-TOFMS平台适用于新建克隆的糖基转移酶酶活反应的监测,与现有的高通量方法相比,在速度、灵敏度、重现性、自动化和溶剂消耗方面具有绝对优势.
以wabD(大腸桿菌O77中O抗原基因簇內)編碼的α-1,3-甘露糖轉移酶、wfgD(大腸桿菌O152中O抗原基因簇內)編碼的β-1,3-葡萄糖轉移酶和ωfeD(誌賀氏菌鮑氏O14中O抗原基因簇內)編碼的β-1,4-半乳糖基轉移酶酶促反應產物為研究對象,嘗試應用踫撞誘導解離(CID)負離子模式基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜(MALDI-TOF MS)技術建立簡單、高效的糖基轉移酶鑑測方法.該方法首先直接用質譜分析0.3μL未經色譜分離、除鹽處理的反應混閤物,隨後應用CID串聯質譜技術對酶活反應產物進行結構錶徵,實現酶活反應的快速檢測.研究結果錶明,CIDMALDI-TOFMS平檯適用于新建剋隆的糖基轉移酶酶活反應的鑑測,與現有的高通量方法相比,在速度、靈敏度、重現性、自動化和溶劑消耗方麵具有絕對優勢.
이wabD(대장간균O77중O항원기인족내)편마적α-1,3-감로당전이매、wfgD(대장간균O152중O항원기인족내)편마적β-1,3-포도당전이매화ωfeD(지하씨균포씨O14중O항원기인족내)편마적β-1,4-반유당기전이매매촉반응산물위연구대상,상시응용팽당유도해리(CID)부리자모식기질보조격광해흡전리-비행시간질보(MALDI-TOF MS)기술건립간단、고효적당기전이매감측방법.해방법수선직접용질보분석0.3μL미경색보분리、제염처리적반응혼합물,수후응용CID천련질보기술대매활반응산물진행결구표정,실현매활반응적쾌속검측.연구결과표명,CIDMALDI-TOFMS평태괄용우신건극륭적당기전이매매활반응적감측,여현유적고통량방법상비,재속도、령민도、중현성、자동화화용제소모방면구유절대우세.
