CAJ | 학술논문

根据锤头状核酶的作用模式,设计、合成并克隆了特异性切割马铃薯卷叶病毒(Potato leaf roll virus,PLRV)中国分离株(PLRV-Ch)复制酶基因负链RNA的二价核酶序列.将该核酶基因克隆到pGEM-4Z中,构建成体外转录载体pGEM-4ZDR；同时将包含核酶切割识别位点的PLRV-Ch复制酶基因cDNA近5’端的874 bp片段反向插入到pGEM-4Z中,构建了体外转录载体pGEM-4ZR5.以线性化的重组质粒pGEM-4ZDR和pGEM-4ZR5为模板,在T7 RNA聚合酶的作用下,分别转录获得核酶RNA和PLRV-Ch复制酶基因5′端负链RNA底物片段.将以上2种RNA转录物混合并经37℃保温后,检测结果表明,所得核酶RNA对PLRV-Ch复制酶基因负链RNA在体外具有较强的特异切割活性.
근거추두상핵매적작용모식,설계、합성병극륭료특이성절할마령서권협병독(Potato leaf roll virus,PLRV)중국분리주(PLRV-Ch)복제매기인부련RNA적이개핵매서렬.장해핵매기인극륭도pGEM-4Z중,구건성체외전록재체pGEM-4ZDR；동시장포함핵매절할식별위점적PLRV-Ch복제매기인cDNA근5’단적874 bp편단반향삽입도pGEM-4Z중,구건료체외전록재체pGEM-4ZR5.이선성화적중조질립pGEM-4ZDR화pGEM-4ZR5위모판,재T7 RNA취합매적작용하,분별전록획득핵매RNA화PLRV-Ch복제매기인5′단부련RNA저물편단.장이상2충RNA전록물혼합병경37℃보온후,검측결과표명,소득핵매RNA대PLRV-Ch복제매기인부련RNA재체외구유교강적특이절할활성.