药物生物技术
藥物生物技術
약물생물기술
PHARMACEUTICAL BIOTECHNOLOGY
2005年
3期
152-157
,共6页
孙石静%张新元%孙雄华%廖建民%沈子龙
孫石靜%張新元%孫雄華%廖建民%瀋子龍
손석정%장신원%손웅화%료건민%침자룡
瑞替普酶%构建%真核表达载体%海带
瑞替普酶%構建%真覈錶達載體%海帶
서체보매%구건%진핵표체재체%해대
用SV40和CaMV 35S两种启动子分别启动瑞替普酶(reteplase,r-PA)和标记基因bar基因,构建能在海带中表达外源基因的重组表达载体.通过PCR方法扩增CaMV 35S启动子、bar基因和r-PA基因,将扩增的3个片段分别克隆到pGEM-T Easy Vector上.将CaMV片段亚克隆到pCAT3-control载体上得到重组质粒pCAT/CaMV;再将bar基因切下插入到CAT/CaMV上得到重组质粒pCAT/C-B,最后将rPA基因片段切下后插入到pCAT/C-B上获得重组质粒pSVrPA/C-B.PCR、酶切及测序结果均表明已成功扩增出CaMV 35S、r-PA和bar基因片段,并已顺次正确插入到真核表达载体PCAT3-control上,最终成功构建了能在海带中表达r-PA的真核表达载体,用基因枪法转入海带中表达,FAPA法测定得到有体外纤溶活性的阳性海带,为后续研究工作打下坚实的基础.
用SV40和CaMV 35S兩種啟動子分彆啟動瑞替普酶(reteplase,r-PA)和標記基因bar基因,構建能在海帶中錶達外源基因的重組錶達載體.通過PCR方法擴增CaMV 35S啟動子、bar基因和r-PA基因,將擴增的3箇片段分彆剋隆到pGEM-T Easy Vector上.將CaMV片段亞剋隆到pCAT3-control載體上得到重組質粒pCAT/CaMV;再將bar基因切下插入到CAT/CaMV上得到重組質粒pCAT/C-B,最後將rPA基因片段切下後插入到pCAT/C-B上穫得重組質粒pSVrPA/C-B.PCR、酶切及測序結果均錶明已成功擴增齣CaMV 35S、r-PA和bar基因片段,併已順次正確插入到真覈錶達載體PCAT3-control上,最終成功構建瞭能在海帶中錶達r-PA的真覈錶達載體,用基因鎗法轉入海帶中錶達,FAPA法測定得到有體外纖溶活性的暘性海帶,為後續研究工作打下堅實的基礎.
용SV40화CaMV 35S량충계동자분별계동서체보매(reteplase,r-PA)화표기기인bar기인,구건능재해대중표체외원기인적중조표체재체.통과PCR방법확증CaMV 35S계동자、bar기인화r-PA기인,장확증적3개편단분별극륭도pGEM-T Easy Vector상.장CaMV편단아극륭도pCAT3-control재체상득도중조질립pCAT/CaMV;재장bar기인절하삽입도CAT/CaMV상득도중조질립pCAT/C-B,최후장rPA기인편단절하후삽입도pCAT/C-B상획득중조질립pSVrPA/C-B.PCR、매절급측서결과균표명이성공확증출CaMV 35S、r-PA화bar기인편단,병이순차정학삽입도진핵표체재체PCAT3-control상,최종성공구건료능재해대중표체r-PA적진핵표체재체,용기인창법전입해대중표체,FAPA법측정득도유체외섬용활성적양성해대,위후속연구공작타하견실적기출.
