CAJ | 학술논문

目的:克隆人黑色素瘤相关抗原MAGE-C2的cDNA,构建真核、原核表达载体并转入相应细胞获得表达.方法:采用RT-PCR技术,从直肠癌细胞系SW480的总RNA中克隆了MAGE-C2 cDNA序列,并将开放读框分别插入质粒pEGFP-C1和pGEX-4T-3中,获得pEGFP-MAGE-C2绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体和pGEX-MAGE-C2谷胱甘肽转移酶(GST)融合蛋白表达载体,将pEGFP-MAGE-C2转染293T细胞,观察绿色荧光融合蛋白在细胞中的定位;将pGEX-MAGE-C2转化大肠杆菌BL21株,经IPTG诱导表达GST融合蛋白,并用谷胱甘肽亲和层析法纯化重组蛋白.结果:获得MAGE-C2开放读框并构建表达载体,测序结果与GenBank收录的序列相一致.真核表达载体转染293T细胞后显示MAGE-C2蛋白定位于细胞核;原核重组蛋白大部分以可溶性形式表达,亲和层析后,获得了较高纯度的MAGE-C2-GST融合蛋白.分析显示原核表达GST融合蛋白的相对分子质量为70 000,使用抗GST单克隆抗体进行Western blot分析证实为目的蛋白.结论:成功的获得MAGE-C2基因,构建了其表达载体并获得表达,为进一步制备MAGE-C2特异性单抗及深入探讨MAGE-C2可能参与肿瘤发生发展的机制提供了重要条件.
목적:극륭인흑색소류상관항원MAGE-C2적cDNA,구건진핵、원핵표체재체병전입상응세포획득표체.방법:채용RT-PCR기술,종직장암세포계SW480적총RNA중극륭료MAGE-C2 cDNA서렬,병장개방독광분별삽입질립pEGFP-C1화pGEX-4T-3중,획득pEGFP-MAGE-C2록색형광단백(GFP)융합표체재체화pGEX-MAGE-C2곡광감태전이매(GST)융합단백표체재체,장pEGFP-MAGE-C2전염293T세포,관찰록색형광융합단백재세포중적정위;장pGEX-MAGE-C2전화대장간균BL21주,경IPTG유도표체GST융합단백,병용곡광감태친화층석법순화중조단백.결과:획득MAGE-C2개방독광병구건표체재체,측서결과여GenBank수록적서렬상일치.진핵표체재체전염293T세포후현시MAGE-C2단백정위우세포핵;원핵중조단백대부분이가용성형식표체,친화층석후,획득료교고순도적MAGE-C2-GST융합단백.분석현시원핵표체GST융합단백적상대분자질량위70 000,사용항GST단극륭항체진행Western blot분석증실위목적단백.결론:성공적획득MAGE-C2기인,구건료기표체재체병획득표체,위진일보제비MAGE-C2특이성단항급심입탐토MAGE-C2가능삼여종류발생발전적궤제제공료중요조건.