科学通报
科學通報
과학통보
CHINESE SCIENCE BULLETIN
2007年
4期
426-431
,共6页
水通道蛋白%NPA motif%突变%水通透性%生源学(biogenesis)
水通道蛋白%NPA motif%突變%水通透性%生源學(biogenesis)
수통도단백%NPA motif%돌변%수통투성%생원학(biogenesis)
水通道蛋白(AQP)序列中的两个天冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸序列(NPA motif)是水通道蛋白家族中高度保守的特征性序列,其晶体结构研究显示,两个NPA motifs位于通道中心的狭窄部位,直接参与水分子的结合和选择性通过.为了进一步研究两个NPA motifs在水通道蛋白结构、功能和生源学(biogenesis)方面的重要性,通过点突变方法分别获得单独缺失NPA1或NPA2 motif以及同时缺失两个NPA motifs的3种水通道AQP1基因突变型.将3种AQP1突变cDNA分别亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1,建立稳定转染3种AQP1基因突变型的CHO细胞系.AQP1免疫荧光分析显示,3种AQP1突变蛋白均能正常表达并定位于质膜,显示AQP1蛋白质表达和细胞内加工过程未受NPA motifs缺失的影响.分别对表达3种AQP1突变蛋白的CHO细胞进行质膜水通透性功能分析,并与表达野生型AQP1的CHO细胞进行比较,结果显示,缺失NPA1或NPA2引起AQP1转水功能下降49.6%和 46.7%,而同时缺失两个NPA motifs的AQP1转水功能与野生型AQP1相似.上述结果显示,水通道AQP1中的NPA motifs在AQP1转水功能中发挥重要作用,但对于AQP1蛋白的表达、细胞内加工和通道基本结构的形成并不起关键作用.
水通道蛋白(AQP)序列中的兩箇天鼕酰胺-脯氨痠-丙氨痠序列(NPA motif)是水通道蛋白傢族中高度保守的特徵性序列,其晶體結構研究顯示,兩箇NPA motifs位于通道中心的狹窄部位,直接參與水分子的結閤和選擇性通過.為瞭進一步研究兩箇NPA motifs在水通道蛋白結構、功能和生源學(biogenesis)方麵的重要性,通過點突變方法分彆穫得單獨缺失NPA1或NPA2 motif以及同時缺失兩箇NPA motifs的3種水通道AQP1基因突變型.將3種AQP1突變cDNA分彆亞剋隆入真覈錶達載體pcDNA3.1,建立穩定轉染3種AQP1基因突變型的CHO細胞繫.AQP1免疫熒光分析顯示,3種AQP1突變蛋白均能正常錶達併定位于質膜,顯示AQP1蛋白質錶達和細胞內加工過程未受NPA motifs缺失的影響.分彆對錶達3種AQP1突變蛋白的CHO細胞進行質膜水通透性功能分析,併與錶達野生型AQP1的CHO細胞進行比較,結果顯示,缺失NPA1或NPA2引起AQP1轉水功能下降49.6%和 46.7%,而同時缺失兩箇NPA motifs的AQP1轉水功能與野生型AQP1相似.上述結果顯示,水通道AQP1中的NPA motifs在AQP1轉水功能中髮揮重要作用,但對于AQP1蛋白的錶達、細胞內加工和通道基本結構的形成併不起關鍵作用.
수통도단백(AQP)서렬중적량개천동선알-포안산-병안산서렬(NPA motif)시수통도단백가족중고도보수적특정성서렬,기정체결구연구현시,량개NPA motifs위우통도중심적협착부위,직접삼여수분자적결합화선택성통과.위료진일보연구량개NPA motifs재수통도단백결구、공능화생원학(biogenesis)방면적중요성,통과점돌변방법분별획득단독결실NPA1혹NPA2 motif이급동시결실량개NPA motifs적3충수통도AQP1기인돌변형.장3충AQP1돌변cDNA분별아극륭입진핵표체재체pcDNA3.1,건립은정전염3충AQP1기인돌변형적CHO세포계.AQP1면역형광분석현시,3충AQP1돌변단백균능정상표체병정위우질막,현시AQP1단백질표체화세포내가공과정미수NPA motifs결실적영향.분별대표체3충AQP1돌변단백적CHO세포진행질막수통투성공능분석,병여표체야생형AQP1적CHO세포진행비교,결과현시,결실NPA1혹NPA2인기AQP1전수공능하강49.6%화 46.7%,이동시결실량개NPA motifs적AQP1전수공능여야생형AQP1상사.상술결과현시,수통도AQP1중적NPA motifs재AQP1전수공능중발휘중요작용,단대우AQP1단백적표체、세포내가공화통도기본결구적형성병불기관건작용.
