中国药学杂志
中國藥學雜誌
중국약학잡지
CHINESE PHARMACEUTICAL JOURNAL
2007年
13期
969-974
,共6页
刘建荣%赵晓瑜%宋小青%静天玉
劉建榮%趙曉瑜%宋小青%靜天玉
류건영%조효유%송소청%정천옥
重组人铜锌超氧化物歧化酶%金属螯合亲和色谱%包含体%复性
重組人銅鋅超氧化物歧化酶%金屬螯閤親和色譜%包含體%複性
중조인동자초양화물기화매%금속오합친화색보%포함체%복성
目的 通过体外复性和纯化技术获得具有高纯度、高生物活性的重组人铜锌超氧化物歧化酶(rhCu,Zn-SOD),并研究复性蛋白的稳定性.方法 以透析法对在大肠杆菌中以包含体形式表达的rhCu,Zn-SOD进行复性,采用金属螯合亲和层析对复性样品进行纯化,通过酶活性测定考查复性和纯化的rhCu,Zn-SOD的热稳定性、pH稳定性和对变性剂的稳定性.结果 建立了体外透析复性的基本条件,其比活可达2 380 U·mg-1.该复性样品经金属螯合亲和层析纯化后,结果得到纯度大于95%、比活5 000 U·mg-1、活性回收率大于100%的目的蛋白.复性和纯化蛋白在温度25～70 ℃和pH 5.0～10.5内活性稳定,并可耐受2～10 mol·L-1的尿素和2%～8%的十二烷基硫酸钠(SDS),对更强烈的变性剂盐酸胍稳定性较弱.结论 确定了重组人Cu,Zn-SOD包含体的体外复性条件和复性蛋白纯化方法,且复性蛋白表现出很好的稳定性,为重组人Cu,Zn-SOD的生产奠定了良好基础.
目的 通過體外複性和純化技術穫得具有高純度、高生物活性的重組人銅鋅超氧化物歧化酶(rhCu,Zn-SOD),併研究複性蛋白的穩定性.方法 以透析法對在大腸桿菌中以包含體形式錶達的rhCu,Zn-SOD進行複性,採用金屬螯閤親和層析對複性樣品進行純化,通過酶活性測定攷查複性和純化的rhCu,Zn-SOD的熱穩定性、pH穩定性和對變性劑的穩定性.結果 建立瞭體外透析複性的基本條件,其比活可達2 380 U·mg-1.該複性樣品經金屬螯閤親和層析純化後,結果得到純度大于95%、比活5 000 U·mg-1、活性迴收率大于100%的目的蛋白.複性和純化蛋白在溫度25～70 ℃和pH 5.0～10.5內活性穩定,併可耐受2～10 mol·L-1的尿素和2%～8%的十二烷基硫痠鈉(SDS),對更彊烈的變性劑鹽痠胍穩定性較弱.結論 確定瞭重組人Cu,Zn-SOD包含體的體外複性條件和複性蛋白純化方法,且複性蛋白錶現齣很好的穩定性,為重組人Cu,Zn-SOD的生產奠定瞭良好基礎.
목적 통과체외복성화순화기술획득구유고순도、고생물활성적중조인동자초양화물기화매(rhCu,Zn-SOD),병연구복성단백적은정성.방법 이투석법대재대장간균중이포함체형식표체적rhCu,Zn-SOD진행복성,채용금속오합친화층석대복성양품진행순화,통과매활성측정고사복성화순화적rhCu,Zn-SOD적열은정성、pH은정성화대변성제적은정성.결과 건립료체외투석복성적기본조건,기비활가체2 380 U·mg-1.해복성양품경금속오합친화층석순화후,결과득도순도대우95%、비활5 000 U·mg-1、활성회수솔대우100%적목적단백.복성화순화단백재온도25～70 ℃화pH 5.0～10.5내활성은정,병가내수2～10 mol·L-1적뇨소화2%～8%적십이완기류산납(SDS),대경강렬적변성제염산고은정성교약.결론 학정료중조인Cu,Zn-SOD포함체적체외복성조건화복성단백순화방법,차복성단백표현출흔호적은정성,위중조인Cu,Zn-SOD적생산전정료량호기출.
