CAJ | 학술논문

目的:明确骨髓间充质干细胞移植到关节软骨损伤处后,该处修复组织的细胞来源,以了解组织修复的过程.方法:实验于2006-01/2007-01在浙江省医学科学院生物工程所完成.①实验材料:3月龄新西兰大白兔,清洁级,体质量约2 kg,由浙江省实验动物中心提供.②实验方法:利用兔性别决定基因序列设计两对PCR引物.取雄性新西兰大白兔进行骨髓间充质干细胞的分离培养与扩增.取雌性新西兰大白兔,暴露其膝关节软骨,用电钻钻孔造成膝关节软骨内侧直径4.5 mm深3.5 mm的全层关节软骨缺损,达软骨下骨.一侧植入骨髓间充质干细胞/胶原海绵,另一侧仅植入胶原海绵.③实验评估:于术后1,2,3,4,5个月取兔关节软骨缺损修复处组织提取总DNA,进行PCR扩增,鉴定移植物中是否存在性别决定基因,以明确细胞来源.结果:移植后1,2,3,4,5个月移植雄兔骨髓间充质干细胞及胶原海绵的关节修复处组织提取的DNA,用设计的引物通过PCR扩增出一条约200 bp大小的条带,大小与阳性对照一致;而另一侧仅移植胶原海绵的关节软骨修复处组织提取的DNA,用设计的引物通过PCR扩增后未发现有条带.PCR扩增阳性样本测序分析显示,每个样本碱基序列一致,与GenBank上性别决定区Y基因组gb|AY785433.1|比较,扩增的样本序列与标准序列完全一致,序列同源性达100%.结论:雌兔关节骨髓间充质干细胞/胶原海绵复合物移植处的新生组织中含有雄性组织,提示新生软骨中有移植的雄性骨髓间充质干细胞分化来的软骨细胞.
목적:명학골수간충질간세포이식도관절연골손상처후,해처수복조직적세포래원,이료해조직수복적과정.방법:실험우2006-01/2007-01재절강성의학과학원생물공정소완성.①실험재료:3월령신서란대백토,청길급,체질량약2 kg,유절강성실험동물중심제공.②실험방법:이용토성별결정기인서렬설계량대PCR인물.취웅성신서란대백토진행골수간충질간세포적분리배양여확증.취자성신서란대백토,폭로기슬관절연골,용전찬찬공조성슬관절연골내측직경4.5 mm심3.5 mm적전층관절연골결손,체연골하골.일측식입골수간충질간세포/효원해면,령일측부식입효원해면.③실험평고:우술후1,2,3,4,5개월취토관절연골결손수복처조직제취총DNA,진행PCR확증,감정이식물중시부존재성별결정기인,이명학세포래원.결과:이식후1,2,3,4,5개월이식웅토골수간충질간세포급효원해면적관절수복처조직제취적DNA,용설계적인물통과PCR확증출일조약200 bp대소적조대,대소여양성대조일치;이령일측부이식효원해면적관절연골수복처조직제취적DNA,용설계적인물통과PCR확증후미발현유조대.PCR확증양성양본측서분석현시,매개양본감기서렬일치,여GenBank상성별결정구Y기인조gb|AY785433.1|비교,확증적양본서렬여표준서렬완전일치,서렬동원성체100%.결론:자토관절골수간충질간세포/효원해면복합물이식처적신생조직중함유웅성조직,제시신생연골중유이식적웅성골수간충질간세포분화래적연골세포.