西北农林科技大学学报（自然科学版）
西北農林科技大學學報（自然科學版）
서북농림과기대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NORTHWEST SCI-TECH UNIVERSITY OF AGRICULTURE AND FORESTRY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2008年
1期
183-188
,共6页
屈志鹏%王晓杰%徐亮胜%贾涛%康振生
屈誌鵬%王曉傑%徐亮勝%賈濤%康振生
굴지붕%왕효걸%서량성%가도%강진생
ABI3130xl全自动测序仪%DNA测序%BigDye%DNA模板
ABI3130xl全自動測序儀%DNA測序%BigDye%DNA模闆
ABI3130xl전자동측서의%DNA측서%BigDye%DNA모판
[目的]提高利用ABI3130xl全自动测序仪对小麦与条锈菌互作的cDNA文库进行大规模测序的成功率,降低成本.[方法]将BigDye(BigDye(R) Tem1nator V3.1 Cycle Sequencing RR-100)分别稀释16,24和32倍设计测序的PCR反应体系,分析了EDTA溶液(125 mmol/L,pH 7.0)和醋酸钠溶液(3 mol/L,pH 5.2)以及不同模板类型等相关因素对测序结果的影响.[结果]BigDye稀释16倍的PCR反应体系的测序结果易出现染料峰,影响碱基正确读值;稀释32倍体系的测序结果中可用序列短,成功率低;稀释24倍体系测序结果的可用序列长且准确率高,为最佳反应体系.EDTA溶液和醋酸钠溶液可提高DNA纯化的质量,改善测序效果.以质粒DNA为模板测序较PCR产物直接测序效果好,通过控制模板质量可以提高测序成功率.[结论]利用优化体系共测得15 000条ESTs序列,其中有高读长序列13 080条,占87.2%,表明该优化体系简单有效,且可有效节约成本.
[目的]提高利用ABI3130xl全自動測序儀對小麥與條鏽菌互作的cDNA文庫進行大規模測序的成功率,降低成本.[方法]將BigDye(BigDye(R) Tem1nator V3.1 Cycle Sequencing RR-100)分彆稀釋16,24和32倍設計測序的PCR反應體繫,分析瞭EDTA溶液(125 mmol/L,pH 7.0)和醋痠鈉溶液(3 mol/L,pH 5.2)以及不同模闆類型等相關因素對測序結果的影響.[結果]BigDye稀釋16倍的PCR反應體繫的測序結果易齣現染料峰,影響堿基正確讀值;稀釋32倍體繫的測序結果中可用序列短,成功率低;稀釋24倍體繫測序結果的可用序列長且準確率高,為最佳反應體繫.EDTA溶液和醋痠鈉溶液可提高DNA純化的質量,改善測序效果.以質粒DNA為模闆測序較PCR產物直接測序效果好,通過控製模闆質量可以提高測序成功率.[結論]利用優化體繫共測得15 000條ESTs序列,其中有高讀長序列13 080條,佔87.2%,錶明該優化體繫簡單有效,且可有效節約成本.
[목적]제고이용ABI3130xl전자동측서의대소맥여조수균호작적cDNA문고진행대규모측서적성공솔,강저성본.[방법]장BigDye(BigDye(R) Tem1nator V3.1 Cycle Sequencing RR-100)분별희석16,24화32배설계측서적PCR반응체계,분석료EDTA용액(125 mmol/L,pH 7.0)화작산납용액(3 mol/L,pH 5.2)이급불동모판류형등상관인소대측서결과적영향.[결과]BigDye희석16배적PCR반응체계적측서결과역출현염료봉,영향감기정학독치;희석32배체계적측서결과중가용서렬단,성공솔저;희석24배체계측서결과적가용서렬장차준학솔고,위최가반응체계.EDTA용액화작산납용액가제고DNA순화적질량,개선측서효과.이질립DNA위모판측서교PCR산물직접측서효과호,통과공제모판질량가이제고측서성공솔.[결론]이용우화체계공측득15 000조ESTs서렬,기중유고독장서렬13 080조,점87.2%,표명해우화체계간단유효,차가유효절약성본.
