中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
7期
557-559,564
,共4页
吴园%钟敏%王易伟%钟静%胡频频%毛旭虎
吳園%鐘敏%王易偉%鐘靜%鬍頻頻%毛旭虎
오완%종민%왕역위%종정%호빈빈%모욱호
结核分枝杆菌%H37Rv株%Rv0341蛋白%iniB基因%克隆%表达
結覈分枝桿菌%H37Rv株%Rv0341蛋白%iniB基因%剋隆%錶達
결핵분지간균%H37Rv주%Rv0341단백%iniB기인%극륭%표체
目的 克隆并表达编码结核分枝杆菌H37RV株Rv0341蛋白的iniB基因.方法 利用PCR从结核分枝杆菌H37Rv株中扩增iniB基因,克隆于pET-22b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化后,通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定目的 蛋白的表达及反应原性.结果 克隆并表达了iniB基因,表达的蛋白相对分子质量约43 000,诱导2 h表达量较高,约为25%.目的 蛋白主要以包涵体形式存在于超声沉淀中,纯化后蛋白纯度可达98%以上.经Western blot检测,纯化蛋白与依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)肺结核患者血清呈现强阳性反应,而与非依R菌肺结核患者血清不反应.结论 已成功克隆并表达了编码结核分枝杆菌H37Rv株Rv0341蛋白的iniB基因,表达的重组蛋白具有反应原性及特异性,为依R菌结核病临床血清学快速诊断方法的建立及试剂盒的研发奠定了基础.
目的 剋隆併錶達編碼結覈分枝桿菌H37RV株Rv0341蛋白的iniB基因.方法 利用PCR從結覈分枝桿菌H37Rv株中擴增iniB基因,剋隆于pET-22b(+)原覈錶達載體,轉化大腸桿菌BL21(DE3),經IPTG誘導錶達,鎳離子親和層析柱純化後,通過SDS-PAGE和Western-blot鑒定目的 蛋白的錶達及反應原性.結果 剋隆併錶達瞭iniB基因,錶達的蛋白相對分子質量約43 000,誘導2 h錶達量較高,約為25%.目的 蛋白主要以包涵體形式存在于超聲沉澱中,純化後蛋白純度可達98%以上.經Western blot檢測,純化蛋白與依賴利福平結覈分枝桿菌(依R菌)肺結覈患者血清呈現彊暘性反應,而與非依R菌肺結覈患者血清不反應.結論 已成功剋隆併錶達瞭編碼結覈分枝桿菌H37Rv株Rv0341蛋白的iniB基因,錶達的重組蛋白具有反應原性及特異性,為依R菌結覈病臨床血清學快速診斷方法的建立及試劑盒的研髮奠定瞭基礎.
목적 극륭병표체편마결핵분지간균H37RV주Rv0341단백적iniB기인.방법 이용PCR종결핵분지간균H37Rv주중확증iniB기인,극륭우pET-22b(+)원핵표체재체,전화대장간균BL21(DE3),경IPTG유도표체,얼리자친화층석주순화후,통과SDS-PAGE화Western-blot감정목적 단백적표체급반응원성.결과 극륭병표체료iniB기인,표체적단백상대분자질량약43 000,유도2 h표체량교고,약위25%.목적 단백주요이포함체형식존재우초성침정중,순화후단백순도가체98%이상.경Western blot검측,순화단백여의뢰리복평결핵분지간균(의R균)폐결핵환자혈청정현강양성반응,이여비의R균폐결핵환자혈청불반응.결론 이성공극륭병표체료편마결핵분지간균H37Rv주Rv0341단백적iniB기인,표체적중조단백구유반응원성급특이성,위의R균결핵병림상혈청학쾌속진단방법적건립급시제합적연발전정료기출.
