江苏大学学报（医学版）
江囌大學學報（醫學版）
강소대학학보（의학판）
JOURNAL OF JIANGSU UNIVERSITY (MEDICINE EDITION)
2010年
3期
194-198
,共5页
黄世腾%邵世和%韩军%黄河%田树伟
黃世騰%邵世和%韓軍%黃河%田樹偉
황세등%소세화%한군%황하%전수위
幽门螺杆菌%原核表达%白细胞介素-8
幽門螺桿菌%原覈錶達%白細胞介素-8
유문라간균%원핵표체%백세포개소-8
目的:克隆表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori)NCTC11637菌株cagL基因,并探讨其对IL-8 mRNA表达的影响.方法:设计cagL引物,应用PCR扩增目的基因片段,TA克隆后测序分析, 用信息学软件分析其物理化学特性,并构建表达载体cagL-PET28a(+)转化E.coli BL-21(DE3),IPTG诱导表达, 镍亲和层析纯化,SDS- PAGE及蛋白质印迹鉴定表达蛋白.纯化蛋白与细胞GES-1共培养,提取细胞总RNA,RT-PCR检测细胞IL-8mRNA表达.结果:测序分析表明cagL编码成熟肽的碱基序列为654 bp,编码217个氨基酸,与基因库公布的其他H.pylori菌株的基因序列同源性为96%～98%,氨基酸同源性为 97%～99%,软件预测显示有多个明显的具有抗原活性的结构域;表达蛋白的相对分子质量约为32 000,蛋白质印迹检测融合蛋白具有良好的抗原活性;重组蛋白作用于GES-1细胞后,可诱导细胞因子 IL-8 在 mRNA 水平上的表达.结论:CagL蛋白可刺激GES-1细胞IL-8 mRNA的表达.
目的:剋隆錶達幽門螺桿菌(Helicobacter pylori, H.pylori)NCTC11637菌株cagL基因,併探討其對IL-8 mRNA錶達的影響.方法:設計cagL引物,應用PCR擴增目的基因片段,TA剋隆後測序分析, 用信息學軟件分析其物理化學特性,併構建錶達載體cagL-PET28a(+)轉化E.coli BL-21(DE3),IPTG誘導錶達, 鎳親和層析純化,SDS- PAGE及蛋白質印跡鑒定錶達蛋白.純化蛋白與細胞GES-1共培養,提取細胞總RNA,RT-PCR檢測細胞IL-8mRNA錶達.結果:測序分析錶明cagL編碼成熟肽的堿基序列為654 bp,編碼217箇氨基痠,與基因庫公佈的其他H.pylori菌株的基因序列同源性為96%～98%,氨基痠同源性為 97%～99%,軟件預測顯示有多箇明顯的具有抗原活性的結構域;錶達蛋白的相對分子質量約為32 000,蛋白質印跡檢測融閤蛋白具有良好的抗原活性;重組蛋白作用于GES-1細胞後,可誘導細胞因子 IL-8 在 mRNA 水平上的錶達.結論:CagL蛋白可刺激GES-1細胞IL-8 mRNA的錶達.
목적:극륭표체유문라간균(Helicobacter pylori, H.pylori)NCTC11637균주cagL기인,병탐토기대IL-8 mRNA표체적영향.방법:설계cagL인물,응용PCR확증목적기인편단,TA극륭후측서분석, 용신식학연건분석기물이화학특성,병구건표체재체cagL-PET28a(+)전화E.coli BL-21(DE3),IPTG유도표체, 얼친화층석순화,SDS- PAGE급단백질인적감정표체단백.순화단백여세포GES-1공배양,제취세포총RNA,RT-PCR검측세포IL-8mRNA표체.결과:측서분석표명cagL편마성숙태적감기서렬위654 bp,편마217개안기산,여기인고공포적기타H.pylori균주적기인서렬동원성위96%～98%,안기산동원성위 97%～99%,연건예측현시유다개명현적구유항원활성적결구역;표체단백적상대분자질량약위32 000,단백질인적검측융합단백구유량호적항원활성;중조단백작용우GES-1세포후,가유도세포인자 IL-8 재 mRNA 수평상적표체.결론:CagL단백가자격GES-1세포IL-8 mRNA적표체.
