检验医学
檢驗醫學
검험의학
LABORATORY MEDICINE
2011年
5期
291-294
,共4页
向莉%郑亚婷%刘华%李娅%王玉明%段勇
嚮莉%鄭亞婷%劉華%李婭%王玉明%段勇
향리%정아정%류화%리아%왕옥명%단용
铜绿假单胞菌%OprM原核表达%OprM多克隆抗体
銅綠假單胞菌%OprM原覈錶達%OprM多剋隆抗體
동록가단포균%OprM원핵표체%OprM다극륭항체
目的 制备铜绿假单胞菌(PA)主动外排系统外膜蛋白OprM及抗OprM多克隆抗体,为深入研究主动外排系统奠定基础.方法 从PA基因组中克隆oprM基因,构建pET28a-c-OprM表达载体,在大肠埃希菌中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并用免疫转印试验(Western blot)验证,建立重组OprM纯化方案,免疫动物制备多克隆抗体.结果 扩增出带有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点及保护碱基的oprM基因序列,构建了pET28a-c-OprM表达载体,诱导表达的重组OprM蛋白为带有His标签的不可溶包涵体,建立并优化了重组OprM的纯化方法,免疫小鼠获得抗OprM蛋白的多克隆抗体.结论 成功制备了OprM蛋白和抗OprM多克隆抗体,为深入研究该蛋白及相关的主动外排系统提供了有效手段.
目的 製備銅綠假單胞菌(PA)主動外排繫統外膜蛋白OprM及抗OprM多剋隆抗體,為深入研究主動外排繫統奠定基礎.方法 從PA基因組中剋隆oprM基因,構建pET28a-c-OprM錶達載體,在大腸埃希菌中經異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達併用免疫轉印試驗(Western blot)驗證,建立重組OprM純化方案,免疫動物製備多剋隆抗體.結果 擴增齣帶有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位點及保護堿基的oprM基因序列,構建瞭pET28a-c-OprM錶達載體,誘導錶達的重組OprM蛋白為帶有His標籤的不可溶包涵體,建立併優化瞭重組OprM的純化方法,免疫小鼠穫得抗OprM蛋白的多剋隆抗體.結論 成功製備瞭OprM蛋白和抗OprM多剋隆抗體,為深入研究該蛋白及相關的主動外排繫統提供瞭有效手段.
목적 제비동록가단포균(PA)주동외배계통외막단백OprM급항OprM다극륭항체,위심입연구주동외배계통전정기출.방법 종PA기인조중극륭oprM기인,구건pET28a-c-OprM표체재체,재대장애희균중경이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체병용면역전인시험(Western blot)험증,건립중조OprM순화방안,면역동물제비다극륭항체.결과 확증출대유EcoRⅠ화NotⅠ매절위점급보호감기적oprM기인서렬,구건료pET28a-c-OprM표체재체,유도표체적중조OprM단백위대유His표첨적불가용포함체,건립병우화료중조OprM적순화방법,면역소서획득항OprM단백적다극륭항체.결론 성공제비료OprM단백화항OprM다극륭항체,위심입연구해단백급상관적주동외배계통제공료유효수단.
