CAJ | 학술논문

目的:探讨脂多糖(LPS)对永生化小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3通透性的影响及可能的机制.方法:实验分3组:bEnd.3细胞组、bEnd.3/vector细胞组和bEnd.3/muIκBα细胞组,后2组中分别转染空载pcDNA3.1hygro质粒和IκBα显性负性突变体DNMu-IκBα质粒.利用报告基因法、跨内皮细胞电阻抗(TEER)法、直接荧光染色法和免疫印迹(Western blotting)法分别检测LPS对细胞的NF-κB活性、细胞通透性、骨架蛋白F-actin分布、紧密连接蛋白(ZO-1和claudin-5)表达以及肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化水平的影响.结果:bEnd.3组和bEnd.3/vector组细胞中,LPS作用0.5 h可引起NF-κB活化(P<0.05);3 h时细胞TEER开始下降(P<0.05),并伴随细胞F-actin重构,ZO-1表达下调;12 h时,LPS对细胞的TEER、F-actin、ZO-1和claudin-5的破坏程度均达到最高.LPS对bEnd.3组和bEnd.3/vector组细胞早期损害伴有MLC磷酸化增加.而bEnd.3/muIκBα组细胞的NF-κB活性被明显抑制;相应时点,LPS对细胞的TEER、F-actin、ZO-1和claudin-5的损害作用也被减轻.同时LPS引起细胞MLC磷酸化增加的作用被明显抑制.结论:LPS通过破坏紧密连接增加脑微血管内皮细胞的通透性,该过程受NF-κB调控.
목적:탐토지다당(LPS)대영생화소서뇌미혈관내피세포bEnd.3통투성적영향급가능적궤제.방법:실험분3조:bEnd.3세포조、bEnd.3/vector세포조화bEnd.3/muIκBα세포조,후2조중분별전염공재pcDNA3.1hygro질립화IκBα현성부성돌변체DNMu-IκBα질립.이용보고기인법、과내피세포전조항(TEER)법、직접형광염색법화면역인적(Western blotting)법분별검측LPS대세포적NF-κB활성、세포통투성、골가단백F-actin분포、긴밀련접단백(ZO-1화claudin-5)표체이급기구단백경련(MLC)린산화수평적영향.결과:bEnd.3조화bEnd.3/vector조세포중,LPS작용0.5 h가인기NF-κB활화(P<0.05);3 h시세포TEER개시하강(P<0.05),병반수세포F-actin중구,ZO-1표체하조;12 h시,LPS대세포적TEER、F-actin、ZO-1화claudin-5적파배정도균체도최고.LPS대bEnd.3조화bEnd.3/vector조세포조기손해반유MLC린산화증가.이bEnd.3/muIκBα조세포적NF-κB활성피명현억제;상응시점,LPS대세포적TEER、F-actin、ZO-1화claudin-5적손해작용야피감경.동시LPS인기세포MLC린산화증가적작용피명현억제.결론:LPS통과파배긴밀련접증가뇌미혈관내피세포적통투성,해과정수NF-κB조공.