中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2011年
23期
12-16
,共5页
于永生%罗晓彤%张立春%朴庆林
于永生%囉曉彤%張立春%樸慶林
우영생%라효동%장립춘%박경림
牛胎儿成纤维细胞%线虫ω-3脂肪酸去饱和酶%基因转染%脂质体
牛胎兒成纖維細胞%線蟲ω-3脂肪痠去飽和酶%基因轉染%脂質體
우태인성섬유세포%선충ω-3지방산거포화매%기인전염%지질체
为利用核移植法获取转基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛胎儿成纤维细胞并进行了携带线虫ω-3脂肪酸去饱和酶cDNA的表达载体转染.首先 采用组织块贴壁法分离培养牛胎儿成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导转染牛胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆,PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,对阳性克隆进行传代2～3次后利用RT-PCR检测外源基因的转录.结果表明,组织块贴壁后7天可获取原代成纤维细胞,基因转染后利用G418筛选9天即可获得转基因细胞,对转基因细胞进行传代,PCR检测显示CMV启动子和ω-3脂肪酸去饱和酶cDNA整合到细胞基因组中,RT-PCR检测显示ω-3脂肪酸去饱和酶mRNA在转基因传代细胞中得到有效转录,为下一步通过核移植方法获得转基因肉牛提供了基础.
為利用覈移植法穫取轉基因剋隆牛提供供體細胞,體外分離培養牛胎兒成纖維細胞併進行瞭攜帶線蟲ω-3脂肪痠去飽和酶cDNA的錶達載體轉染.首先 採用組織塊貼壁法分離培養牛胎兒成纖維細胞,線蟲ω-3脂肪痠去飽和酶基因錶達載體以脂質法介導轉染牛胎兒成纖維細胞,通過G418篩選穫得穩定轉染的細胞剋隆,PCR鑒定外源基因在細胞基因組中的整閤,對暘性剋隆進行傳代2～3次後利用RT-PCR檢測外源基因的轉錄.結果錶明,組織塊貼壁後7天可穫取原代成纖維細胞,基因轉染後利用G418篩選9天即可穫得轉基因細胞,對轉基因細胞進行傳代,PCR檢測顯示CMV啟動子和ω-3脂肪痠去飽和酶cDNA整閤到細胞基因組中,RT-PCR檢測顯示ω-3脂肪痠去飽和酶mRNA在轉基因傳代細胞中得到有效轉錄,為下一步通過覈移植方法穫得轉基因肉牛提供瞭基礎.
위이용핵이식법획취전기인극륭우제공공체세포,체외분리배양우태인성섬유세포병진행료휴대선충ω-3지방산거포화매cDNA적표체재체전염.수선 채용조직괴첩벽법분리배양우태인성섬유세포,선충ω-3지방산거포화매기인표체재체이지질법개도전염우태인성섬유세포,통과G418사선획득은정전염적세포극륭,PCR감정외원기인재세포기인조중적정합,대양성극륭진행전대2～3차후이용RT-PCR검측외원기인적전록.결과표명,조직괴첩벽후7천가획취원대성섬유세포,기인전염후이용G418사선9천즉가획득전기인세포,대전기인세포진행전대,PCR검측현시CMV계동자화ω-3지방산거포화매cDNA정합도세포기인조중,RT-PCR검측현시ω-3지방산거포화매mRNA재전기인전대세포중득도유효전록,위하일보통과핵이식방법획득전기인육우제공료기출.
