重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2012年
6期
529-531
,共3页
链球菌,化脓%抑制消减杂交%毒力基因%基因消减文库
鏈毬菌,化膿%抑製消減雜交%毒力基因%基因消減文庫
련구균,화농%억제소감잡교%독력기인%기인소감문고
目的 构建化脓性链球菌高毒力株特异基因文库,克隆和筛选化脓性链球菌高毒力株特异表达基因.方法 采用抑制消减杂交技术(SSH),以从患者体内所分离链球菌为毒力菌株,分离特异表达基因,将其与T载体进行T/A连接构建文库,将连接产物转化感受态大肠杆菌TOP10进行文库扩增后,转化菌液涂布于LB固体平板,构建化脓性链球菌毒力株特异基因消减文库,用斑点杂交初步筛选消减文库后,将获得的阳性克隆进行测序和同源性分析.结果 酶切产物为100～2 000 bp,连接效率大于50%,消减组与非消减组差异明显,成功构建了化脓性链球菌毒力株特异基因消减文库,所得阳性克隆经斑点杂交筛选后测序,与Genebank数据库进行同源性比对,5个未知序列可能为新基因,7个与已知基因有高度的同源性.结论 用SSH及T/A克隆技术成功构建了人源化脓性链球菌高毒力株基因文库,5个未知的新序列有待于进一步的研究.
目的 構建化膿性鏈毬菌高毒力株特異基因文庫,剋隆和篩選化膿性鏈毬菌高毒力株特異錶達基因.方法 採用抑製消減雜交技術(SSH),以從患者體內所分離鏈毬菌為毒力菌株,分離特異錶達基因,將其與T載體進行T/A連接構建文庫,將連接產物轉化感受態大腸桿菌TOP10進行文庫擴增後,轉化菌液塗佈于LB固體平闆,構建化膿性鏈毬菌毒力株特異基因消減文庫,用斑點雜交初步篩選消減文庫後,將穫得的暘性剋隆進行測序和同源性分析.結果 酶切產物為100～2 000 bp,連接效率大于50%,消減組與非消減組差異明顯,成功構建瞭化膿性鏈毬菌毒力株特異基因消減文庫,所得暘性剋隆經斑點雜交篩選後測序,與Genebank數據庫進行同源性比對,5箇未知序列可能為新基因,7箇與已知基因有高度的同源性.結論 用SSH及T/A剋隆技術成功構建瞭人源化膿性鏈毬菌高毒力株基因文庫,5箇未知的新序列有待于進一步的研究.
목적 구건화농성련구균고독력주특이기인문고,극륭화사선화농성련구균고독력주특이표체기인.방법 채용억제소감잡교기술(SSH),이종환자체내소분리련구균위독력균주,분리특이표체기인,장기여T재체진행T/A련접구건문고,장련접산물전화감수태대장간균TOP10진행문고확증후,전화균액도포우LB고체평판,구건화농성련구균독력주특이기인소감문고,용반점잡교초보사선소감문고후,장획득적양성극륭진행측서화동원성분석.결과 매절산물위100～2 000 bp,련접효솔대우50%,소감조여비소감조차이명현,성공구건료화농성련구균독력주특이기인소감문고,소득양성극륭경반점잡교사선후측서,여Genebank수거고진행동원성비대,5개미지서렬가능위신기인,7개여이지기인유고도적동원성.결론 용SSH급T/A극륭기술성공구건료인원화농성련구균고독력주기인문고,5개미지적신서렬유대우진일보적연구.
