CAJ | 학술논문

农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)VirD2蛋白具有与单链T-DNA(ssT-DNA)共价结合并将其转运至植物细胞核,将外源基因高效整合进核基因组的功能；如果将该蛋白改定位于质体,则有可能利用其将外源基因携带进质体,建立质体转化新方法.本研究对VirD2蛋白的定位信号进行了改造,采用重叠延伸PCR突变技术对Vir2的N端核定位信号(NLS)编码序列进行点突变,对C端编码序列实施缺失突变,并在合成的突变VirD2(mVirD2)基因3’端连接上增强绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因,在其5’端加上或不加源自拟南芥(A rabidopsis thaliana)冷调节基因(AtCOR15A)的质体定位信号肽编码序列,分别构成pt-mVirD2-eGFP和mVirD2-eGFP嵌合基因,由CaMV 35 S启动子控制,经农杆菌介导整合进烟草(ic otiana tab ac um)核基因组.荧光检验显示,mVirD2带质体定位信号时绿色荧光集中于叶绿体,mVirD2不带质体定位信号时绿色荧光弥散在细胞质中,且两者的细胞核均无荧光,表明pt-mVirD2-eGFP嵌合基因表达的蛋白具有质体定位特性,并失去了核定位能力.该结果为今后探讨利用pt-mVirD2融合蛋白将外源DNA主动定向牵引进质体,实现质体高效转化研究提供基础资料.
농간균(Agrobacterium tumefaciens)VirD2단백구유여단련T-DNA(ssT-DNA)공개결합병장기전운지식물세포핵,장외원기인고효정합진핵기인조적공능；여과장해단백개정위우질체,칙유가능이용기장외원기인휴대진질체,건립질체전화신방법.본연구대VirD2단백적정위신호진행료개조,채용중첩연신PCR돌변기술대Vir2적N단핵정위신호(NLS)편마서렬진행점돌변,대C단편마서렬실시결실돌변,병재합성적돌변VirD2(mVirD2)기인3’단련접상증강록색형광단백(eGFP)보고기인,재기5’단가상혹불가원자의남개(A rabidopsis thaliana)랭조절기인(AtCOR15A)적질체정위신호태편마서렬,분별구성pt-mVirD2-eGFP화mVirD2-eGFP감합기인,유CaMV 35 S계동자공제,경농간균개도정합진연초(ic otiana tab ac um)핵기인조.형광검험현시,mVirD2대질체정위신호시록색형광집중우협록체,mVirD2불대질체정위신호시록색형광미산재세포질중,차량자적세포핵균무형광,표명pt-mVirD2-eGFP감합기인표체적단백구유질체정위특성,병실거료핵정위능력.해결과위금후탐토이용pt-mVirD2융합단백장외원DNA주동정향견인진질체,실현질체고효전화연구제공기출자료.