CAJ | 학술논문

目的:构建鼠肝炎冠状病毒(MHV)非结构蛋白1(NSP1)及其突变体(NSP1 mu)的原核重组表达质粒,在大肠杆菌中分别融合表达重组NSP1及NSP1 mu.方法:以现有质粒载体为模板,扩增编码NSP1及NSP1 mu的基因片段,并克隆至pMD18-T克隆载体；菌落PCR鉴定阳性克隆并测序分析；将阳性克隆的目的片段亚克隆至表达载体pET-28a,并转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,PCR和双酶切鉴定转化菌落；将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并加入IPTG诱导表达,SDS-PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的表达.结果:PCR扩增得到表达NSP1及NSP1 mu的特异片段,并克隆到pMD18-T载体,测序结果正确无误；构建了NSP1和NSP1 mu的重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中分别融合表达了重组NSP1及NSP1 mu,表达的目的蛋白均能与His单克隆抗体特异结合；用Ni-NTA琼脂糖试剂盒纯化重组蛋白,获得可溶性的NSP1及NSP1 mu,相对分子质量分别为27×103和28×103.结论:在大肠杆菌中分别表达并纯化获得了大量可溶性重组NSP1及NSP1 mu.
목적:구건서간염관상병독(MHV)비결구단백1(NSP1)급기돌변체(NSP1 mu)적원핵중조표체질립,재대장간균중분별융합표체중조NSP1급NSP1 mu.방법:이현유질립재체위모판,확증편마NSP1급NSP1 mu적기인편단,병극륭지pMD18-T극륭재체；균락PCR감정양성극륭병측서분석；장양성극륭적목적편단아극륭지표체재체pET-28a,병전화대장간균TOP10감수태세포,PCR화쌍매절감정전화균락；장양성질립전화대장간균BL21(DE3)감수태세포병가입IPTG유도표체,SDS-PAGE화면역인적분석목적단백적표체.결과:PCR확증득도표체NSP1급NSP1 mu적특이편단,병극륭도pMD18-T재체,측서결과정학무오；구건료NSP1화NSP1 mu적중조표체질립,병재대장간균BL21(DE3)중분별융합표체료중조NSP1급NSP1 mu,표체적목적단백균능여His단극륭항체특이결합；용Ni-NTA경지당시제합순화중조단백,획득가용성적NSP1급NSP1 mu,상대분자질량분별위27×103화28×103.결론:재대장간균중분별표체병순화획득료대량가용성중조NSP1급NSP1 mu.