三峡大学学报(自然科学版)
三峽大學學報(自然科學版)
삼협대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF UNIVERSITY HYDRAULIC AND ELECTRIC ENGINEERING
2005年
1期
83-87,96
,共6页
李志红%林伟%孙京臣%杨艺峰%张景强
李誌紅%林偉%孫京臣%楊藝峰%張景彊
리지홍%림위%손경신%양예봉%장경강
SARS冠状病毒%N蛋白%原核表达%序列分析%二级结构
SARS冠狀病毒%N蛋白%原覈錶達%序列分析%二級結構
SARS관상병독%N단백%원핵표체%서렬분석%이급결구
通过RT-PCR 获得SARS 冠状病毒N蛋白基因,分别克隆到原核表达载体pET21a, pET32a 和 pGEX-4T-1 中.将3种重组质粒pET21a-N, pET32a-N 和 pGEX-4T-1-N分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,细菌中分别表达出约46kD的重组N蛋白、约60 kD的6 xHis-N 融合蛋白和约70 kD的GST-N 融合蛋白,表达量分别达总蛋白的45%、40%和30%.进一步的分析表明:6 xHis-N 融合蛋白在大肠杆菌中为可溶性表达,该可溶性组分占细菌裂解液的70%左右,且能被6 xHis抗体所识别.用蛋白分析软件对N蛋白进行了序列分析和二级结构预测.SARS 冠状病毒N蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达, 有助于进一步结晶后进行X射线晶体衍射分析其结构与功能.
通過RT-PCR 穫得SARS 冠狀病毒N蛋白基因,分彆剋隆到原覈錶達載體pET21a, pET32a 和 pGEX-4T-1 中.將3種重組質粒pET21a-N, pET32a-N 和 pGEX-4T-1-N分彆轉化大腸桿菌BL21(DE3),經IPTG誘導,細菌中分彆錶達齣約46kD的重組N蛋白、約60 kD的6 xHis-N 融閤蛋白和約70 kD的GST-N 融閤蛋白,錶達量分彆達總蛋白的45%、40%和30%.進一步的分析錶明:6 xHis-N 融閤蛋白在大腸桿菌中為可溶性錶達,該可溶性組分佔細菌裂解液的70%左右,且能被6 xHis抗體所識彆.用蛋白分析軟件對N蛋白進行瞭序列分析和二級結構預測.SARS 冠狀病毒N蛋白在大腸桿菌中的高效可溶性錶達, 有助于進一步結晶後進行X射線晶體衍射分析其結構與功能.
통과RT-PCR 획득SARS 관상병독N단백기인,분별극륭도원핵표체재체pET21a, pET32a 화 pGEX-4T-1 중.장3충중조질립pET21a-N, pET32a-N 화 pGEX-4T-1-N분별전화대장간균BL21(DE3),경IPTG유도,세균중분별표체출약46kD적중조N단백、약60 kD적6 xHis-N 융합단백화약70 kD적GST-N 융합단백,표체량분별체총단백적45%、40%화30%.진일보적분석표명:6 xHis-N 융합단백재대장간균중위가용성표체,해가용성조분점세균렬해액적70%좌우,차능피6 xHis항체소식별.용단백분석연건대N단백진행료서렬분석화이급결구예측.SARS 관상병독N단백재대장간균중적고효가용성표체, 유조우진일보결정후진행X사선정체연사분석기결구여공능.
