生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2005年
3期
282-287
,共6页
王宇%姚慧%安晓荣%陈永福%苟克勉
王宇%姚慧%安曉榮%陳永福%茍剋勉
왕우%요혜%안효영%진영복%구극면
小鼠%卵母细胞%胚胎%tert基因%hprt基因%端粒酶%RT-PCR
小鼠%卵母細胞%胚胎%tert基因%hprt基因%耑粒酶%RT-PCR
소서%란모세포%배태%tert기인%hprt기인%단립매%RT-PCR
用RT-PCR引物分别扩增成年昆明(KM)小鼠睾丸、脾脏、肾脏、肝脏和胸腺组织的总RNA发现,端粒酶催化亚基基因tert在这些组织中都有转录,目标产物正确组装到PMD 18-T载体后测序,结果与己知cDNA序列一致.PMSG/hCG超数排卵方法获得KM小鼠成熟卵母细胞和CZB溶液体外培养的胚胎(KM♀×KM ♂),用酸性Tyrode's溶液消化透明带后,采用巢式RT-PCR,同时分析tert基因和持家基因hprt的转录发现,对于单个样品来说,全部卵母细胞(15 h-post hCG,10/10)都存在hprt转录本,其中,只有40%(4/10)还同时存在tert转录本.原核形成初期(20 h-post hCG,6/6)和原核晚期(30 h post-hCG,8/8)的受精卵,以及发育至2-C早期的胚胎(35 h-post hCG,7/7)都不转录tert基因,只有hprt mRNA存在;2-C晚期(50 h-post hCG)时,两个基因同时转录(4/8)和一个基因单独转录(4/8)的胚胎各占50%;从4-C阶段(65 h-post hCG,4/4)开始,包括8-C阶段(75 h-posthCG,4/4),桑椹胚阶段(93 h-post hCG,4/4),直至囊胚阶段(118 h-post hCG,4/4),所有的胚胎都同时转录tert和hprt基因,而且转录水平明显升高.以20枚胚胎量为模板进行RT-PCR发现,原核早期,原核晚期的胚胎中仍然没有tert基因转录,只有hprt mRNA,但是,在2-C早期胚胎中同时检测到了hprt和tert两种mRNA.结果表明,持家基因hprt在成熟卵母细胞受精前后,以及胚胎早期发育过程中均存在转录本.40%卵母细胞中存在的tertmRNA在受精后很快降解,检测不到;胚胎基因组在2-C早期开始转录tert mRNA,转录水平逐渐上升.结果暗示,小鼠胚胎的基因组DNA在2-C早期开始启动,功能基因tert也在此时开始转录,可能与胚胎发育初期的染色体保护有关.
用RT-PCR引物分彆擴增成年昆明(KM)小鼠睪汍、脾髒、腎髒、肝髒和胸腺組織的總RNA髮現,耑粒酶催化亞基基因tert在這些組織中都有轉錄,目標產物正確組裝到PMD 18-T載體後測序,結果與己知cDNA序列一緻.PMSG/hCG超數排卵方法穫得KM小鼠成熟卵母細胞和CZB溶液體外培養的胚胎(KM♀×KM ♂),用痠性Tyrode's溶液消化透明帶後,採用巢式RT-PCR,同時分析tert基因和持傢基因hprt的轉錄髮現,對于單箇樣品來說,全部卵母細胞(15 h-post hCG,10/10)都存在hprt轉錄本,其中,隻有40%(4/10)還同時存在tert轉錄本.原覈形成初期(20 h-post hCG,6/6)和原覈晚期(30 h post-hCG,8/8)的受精卵,以及髮育至2-C早期的胚胎(35 h-post hCG,7/7)都不轉錄tert基因,隻有hprt mRNA存在;2-C晚期(50 h-post hCG)時,兩箇基因同時轉錄(4/8)和一箇基因單獨轉錄(4/8)的胚胎各佔50%;從4-C階段(65 h-post hCG,4/4)開始,包括8-C階段(75 h-posthCG,4/4),桑椹胚階段(93 h-post hCG,4/4),直至囊胚階段(118 h-post hCG,4/4),所有的胚胎都同時轉錄tert和hprt基因,而且轉錄水平明顯升高.以20枚胚胎量為模闆進行RT-PCR髮現,原覈早期,原覈晚期的胚胎中仍然沒有tert基因轉錄,隻有hprt mRNA,但是,在2-C早期胚胎中同時檢測到瞭hprt和tert兩種mRNA.結果錶明,持傢基因hprt在成熟卵母細胞受精前後,以及胚胎早期髮育過程中均存在轉錄本.40%卵母細胞中存在的tertmRNA在受精後很快降解,檢測不到;胚胎基因組在2-C早期開始轉錄tert mRNA,轉錄水平逐漸上升.結果暗示,小鼠胚胎的基因組DNA在2-C早期開始啟動,功能基因tert也在此時開始轉錄,可能與胚胎髮育初期的染色體保護有關.
용RT-PCR인물분별확증성년곤명(KM)소서고환、비장、신장、간장화흉선조직적총RNA발현,단립매최화아기기인tert재저사조직중도유전록,목표산물정학조장도PMD 18-T재체후측서,결과여기지cDNA서렬일치.PMSG/hCG초수배란방법획득KM소서성숙란모세포화CZB용액체외배양적배태(KM♀×KM ♂),용산성Tyrode's용액소화투명대후,채용소식RT-PCR,동시분석tert기인화지가기인hprt적전록발현,대우단개양품래설,전부란모세포(15 h-post hCG,10/10)도존재hprt전록본,기중,지유40%(4/10)환동시존재tert전록본.원핵형성초기(20 h-post hCG,6/6)화원핵만기(30 h post-hCG,8/8)적수정란,이급발육지2-C조기적배태(35 h-post hCG,7/7)도불전록tert기인,지유hprt mRNA존재;2-C만기(50 h-post hCG)시,량개기인동시전록(4/8)화일개기인단독전록(4/8)적배태각점50%;종4-C계단(65 h-post hCG,4/4)개시,포괄8-C계단(75 h-posthCG,4/4),상심배계단(93 h-post hCG,4/4),직지낭배계단(118 h-post hCG,4/4),소유적배태도동시전록tert화hprt기인,이차전록수평명현승고.이20매배태량위모판진행RT-PCR발현,원핵조기,원핵만기적배태중잉연몰유tert기인전록,지유hprt mRNA,단시,재2-C조기배태중동시검측도료hprt화tert량충mRNA.결과표명,지가기인hprt재성숙란모세포수정전후,이급배태조기발육과정중균존재전록본.40%란모세포중존재적tertmRNA재수정후흔쾌강해,검측불도;배태기인조재2-C조기개시전록tert mRNA,전록수평축점상승.결과암시,소서배태적기인조DNA재2-C조기개시계동,공능기인tert야재차시개시전록,가능여배태발육초기적염색체보호유관.
