北京口腔医学
北京口腔醫學
북경구강의학
BEIJING JOURNAL OF STOMATOLOGY
2009年
1期
20-23
,共4页
柯小亮%孙宏晨%臧光祥%刘金钟%苗雷英%乔春燕
柯小亮%孫宏晨%臧光祥%劉金鐘%苗雷英%喬春燕
가소량%손굉신%장광상%류금종%묘뢰영%교춘연
腺样囊性癌%腺病毒%基因治疗
腺樣囊性癌%腺病毒%基因治療
선양낭성암%선병독%기인치료
目的 探讨以抑癌基因p16为靶基因,腺病毒(Ad)为载体的重组基因治疗药物Ad5CMV-p16对人涎腺腺样囊性癌细胞系(SACC-83)的作用.方法 含有增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的腺病毒载体(Ad5CMV-EGFP)转染SACC-83细胞,确定重组腺病毒载体转染效率.Ad5CMV-EGFP为对照组,Ad5CMV-p16和Ad5CMV-EGFP共转染为实验组分别感染SACC-83细胞,采用RT-PCR方法检测p16基因的表达.应用倒置显微镜观察细胞形态,MTT检测细胞的增殖率,软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成,流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 Ad5CMV-EGFP在1000 viral particles [vp]/ cell 时转染效率达95%以上.RT-PCR 实验组可检测到p16基因表达,而对照组未见表达.细胞单纯转染Ad5CMV-EGFP或共同转染Ad5CMV-p16后,随时间增长细胞增殖率逐渐下降,共同转染组较单纯转染Ad5CMV-EGFP组比变化更明显.软琼脂克隆形成实验显示,共转染组较对照组有更强的抑制细胞克隆形成能力.流式细胞仪检测细胞周期变化显示Ad5CMV-EGFP和Ad5CMV- p16共转染组G0-G1期细胞比例比单独转染Ad5CMV-EGFP组大.结论 Ad5CMV-p16在体外能明显抑制SACC-83细胞增殖能力和活性,有望成为一种有效的基因治疗药物.
目的 探討以抑癌基因p16為靶基因,腺病毒(Ad)為載體的重組基因治療藥物Ad5CMV-p16對人涎腺腺樣囊性癌細胞繫(SACC-83)的作用.方法 含有增彊型綠色熒光蛋白基因(EGFP)的腺病毒載體(Ad5CMV-EGFP)轉染SACC-83細胞,確定重組腺病毒載體轉染效率.Ad5CMV-EGFP為對照組,Ad5CMV-p16和Ad5CMV-EGFP共轉染為實驗組分彆感染SACC-83細胞,採用RT-PCR方法檢測p16基因的錶達.應用倒置顯微鏡觀察細胞形態,MTT檢測細胞的增殖率,軟瓊脂剋隆形成實驗檢測細胞剋隆形成,流式細胞儀檢測細胞週期變化.結果 Ad5CMV-EGFP在1000 viral particles [vp]/ cell 時轉染效率達95%以上.RT-PCR 實驗組可檢測到p16基因錶達,而對照組未見錶達.細胞單純轉染Ad5CMV-EGFP或共同轉染Ad5CMV-p16後,隨時間增長細胞增殖率逐漸下降,共同轉染組較單純轉染Ad5CMV-EGFP組比變化更明顯.軟瓊脂剋隆形成實驗顯示,共轉染組較對照組有更彊的抑製細胞剋隆形成能力.流式細胞儀檢測細胞週期變化顯示Ad5CMV-EGFP和Ad5CMV- p16共轉染組G0-G1期細胞比例比單獨轉染Ad5CMV-EGFP組大.結論 Ad5CMV-p16在體外能明顯抑製SACC-83細胞增殖能力和活性,有望成為一種有效的基因治療藥物.
목적 탐토이억암기인p16위파기인,선병독(Ad)위재체적중조기인치료약물Ad5CMV-p16대인연선선양낭성암세포계(SACC-83)적작용.방법 함유증강형록색형광단백기인(EGFP)적선병독재체(Ad5CMV-EGFP)전염SACC-83세포,학정중조선병독재체전염효솔.Ad5CMV-EGFP위대조조,Ad5CMV-p16화Ad5CMV-EGFP공전염위실험조분별감염SACC-83세포,채용RT-PCR방법검측p16기인적표체.응용도치현미경관찰세포형태,MTT검측세포적증식솔,연경지극륭형성실험검측세포극륭형성,류식세포의검측세포주기변화.결과 Ad5CMV-EGFP재1000 viral particles [vp]/ cell 시전염효솔체95%이상.RT-PCR 실험조가검측도p16기인표체,이대조조미견표체.세포단순전염Ad5CMV-EGFP혹공동전염Ad5CMV-p16후,수시간증장세포증식솔축점하강,공동전염조교단순전염Ad5CMV-EGFP조비변화경명현.연경지극륭형성실험현시,공전염조교대조조유경강적억제세포극륭형성능력.류식세포의검측세포주기변화현시Ad5CMV-EGFP화Ad5CMV- p16공전염조G0-G1기세포비례비단독전염Ad5CMV-EGFP조대.결론 Ad5CMV-p16재체외능명현억제SACC-83세포증식능력화활성,유망성위일충유효적기인치료약물.
