第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2007年
9期
806-809
,共4页
宋敏%白云%段文元%章波%杨晓亚%许雪青
宋敏%白雲%段文元%章波%楊曉亞%許雪青
송민%백운%단문원%장파%양효아%허설청
血管活性肠肽%腺病毒%基因治疗
血管活性腸肽%腺病毒%基因治療
혈관활성장태%선병독%기인치료
目的 构建血管活性肠肽重组腺病毒载体,以期用于体内实验研究.方法 利用RT-PCR扩增小鼠大脑VIP mRNA,亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在pAdeasy内同源重组,筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确,线性化后脂质体法转染293 细胞进行包装、扩增,利用报告基因EGFP对病毒滴度进行监测.PCR、免疫荧光鉴定pAdeasy-VIP感染293 细胞后VIP基因的表达,ELISA检测重组病毒转染后293细胞上清中的表达.结果 测序、酶切证实VIP基因重组腺病毒载体构建成功.RT-PCR,免疫荧光检测pAdeasy-VIP病毒感染的293细胞,均有VIP的表达.与对照组相比,重组病毒转染后293细胞上清中VIP多肽的表达明显增高.结论 成功构建了含小鼠VIP基因的重组腺病毒载体,并成功表达VIP多肽.
目的 構建血管活性腸肽重組腺病毒載體,以期用于體內實驗研究.方法 利用RT-PCR擴增小鼠大腦VIP mRNA,亞剋隆到穿梭質粒pAdTrack-CMV,在pAdeasy內同源重組,篩選暘性剋隆,酶切、測序鑒定正確,線性化後脂質體法轉染293 細胞進行包裝、擴增,利用報告基因EGFP對病毒滴度進行鑑測.PCR、免疫熒光鑒定pAdeasy-VIP感染293 細胞後VIP基因的錶達,ELISA檢測重組病毒轉染後293細胞上清中的錶達.結果 測序、酶切證實VIP基因重組腺病毒載體構建成功.RT-PCR,免疫熒光檢測pAdeasy-VIP病毒感染的293細胞,均有VIP的錶達.與對照組相比,重組病毒轉染後293細胞上清中VIP多肽的錶達明顯增高.結論 成功構建瞭含小鼠VIP基因的重組腺病毒載體,併成功錶達VIP多肽.
목적 구건혈관활성장태중조선병독재체,이기용우체내실험연구.방법 이용RT-PCR확증소서대뇌VIP mRNA,아극륭도천사질립pAdTrack-CMV,재pAdeasy내동원중조,사선양성극륭,매절、측서감정정학,선성화후지질체법전염293 세포진행포장、확증,이용보고기인EGFP대병독적도진행감측.PCR、면역형광감정pAdeasy-VIP감염293 세포후VIP기인적표체,ELISA검측중조병독전염후293세포상청중적표체.결과 측서、매절증실VIP기인중조선병독재체구건성공.RT-PCR,면역형광검측pAdeasy-VIP병독감염적293세포,균유VIP적표체.여대조조상비,중조병독전염후293세포상청중VIP다태적표체명현증고.결론 성공구건료함소서VIP기인적중조선병독재체,병성공표체VIP다태.
