现代检验医学杂志
現代檢驗醫學雜誌
현대검험의학잡지
JOURNAL OF MODERN LABORATORY MEDICINE
2012年
3期
30-34
,共5页
曲霉菌%实时定量PCR%内转录间隔区2
麯黴菌%實時定量PCR%內轉錄間隔區2
곡매균%실시정량PCR%내전록간격구2
目的 建立常见曲霉菌的实时定量PCR诊断技术.方法 针对黄曲霉菌、烟曲霉菌、构巢曲霉菌、黑曲霉菌和土曲霉菌内转录间隔区2(internal transcribed spacer 2,ITS2)保守基因设计引物和探针,通过普通PCR扩增其ITS2基因片段,作为实时定量PCR反应模板,通过实时定量扩增和分析其解链曲线来鉴定常见曲霉菌,同时分析该方法灵敏度.结果 真菌通用引物扩增五种常见曲霉菌ITS2基因DNA片段,大小为350 bp左右.实时定量PCR分析和探针解链曲线分析结果显示土曲霉解链温度(melting temperature,Tm)值为57℃±0.12℃,黄曲霉Tm值为59℃±0.13℃,烟曲霉Tm值为63℃±0.17℃,土曲霉Tm值为66℃±0.15℃,构巢曲霉Tm值为66℃±0.14℃,黑曲霉Tm值为68℃±0.12℃.方法 灵敏度分析显示各曲霉菌最低模板DNA反应浓度分别为烟曲霉51.2· fg/μl,黄曲霉621.3 fg/μl,黑曲霉19.5 fg/μl,土曲霉82.4 fg/μl和构巢曲霉520.8fg/μl.结论 创建一种可快速鉴定五种常见曲霉菌的实时定量PCR诊断技术,该方法特异度好、灵敏度高,符合临床需要,能为侵袭性真菌感染(invasive aspergillosis,IA)提供新的选择.
目的 建立常見麯黴菌的實時定量PCR診斷技術.方法 針對黃麯黴菌、煙麯黴菌、構巢麯黴菌、黑麯黴菌和土麯黴菌內轉錄間隔區2(internal transcribed spacer 2,ITS2)保守基因設計引物和探針,通過普通PCR擴增其ITS2基因片段,作為實時定量PCR反應模闆,通過實時定量擴增和分析其解鏈麯線來鑒定常見麯黴菌,同時分析該方法靈敏度.結果 真菌通用引物擴增五種常見麯黴菌ITS2基因DNA片段,大小為350 bp左右.實時定量PCR分析和探針解鏈麯線分析結果顯示土麯黴解鏈溫度(melting temperature,Tm)值為57℃±0.12℃,黃麯黴Tm值為59℃±0.13℃,煙麯黴Tm值為63℃±0.17℃,土麯黴Tm值為66℃±0.15℃,構巢麯黴Tm值為66℃±0.14℃,黑麯黴Tm值為68℃±0.12℃.方法 靈敏度分析顯示各麯黴菌最低模闆DNA反應濃度分彆為煙麯黴51.2· fg/μl,黃麯黴621.3 fg/μl,黑麯黴19.5 fg/μl,土麯黴82.4 fg/μl和構巢麯黴520.8fg/μl.結論 創建一種可快速鑒定五種常見麯黴菌的實時定量PCR診斷技術,該方法特異度好、靈敏度高,符閤臨床需要,能為侵襲性真菌感染(invasive aspergillosis,IA)提供新的選擇.
목적 건립상견곡매균적실시정량PCR진단기술.방법 침대황곡매균、연곡매균、구소곡매균、흑곡매균화토곡매균내전록간격구2(internal transcribed spacer 2,ITS2)보수기인설계인물화탐침,통과보통PCR확증기ITS2기인편단,작위실시정량PCR반응모판,통과실시정량확증화분석기해련곡선래감정상견곡매균,동시분석해방법령민도.결과 진균통용인물확증오충상견곡매균ITS2기인DNA편단,대소위350 bp좌우.실시정량PCR분석화탐침해련곡선분석결과현시토곡매해련온도(melting temperature,Tm)치위57℃±0.12℃,황곡매Tm치위59℃±0.13℃,연곡매Tm치위63℃±0.17℃,토곡매Tm치위66℃±0.15℃,구소곡매Tm치위66℃±0.14℃,흑곡매Tm치위68℃±0.12℃.방법 령민도분석현시각곡매균최저모판DNA반응농도분별위연곡매51.2· fg/μl,황곡매621.3 fg/μl,흑곡매19.5 fg/μl,토곡매82.4 fg/μl화구소곡매520.8fg/μl.결론 창건일충가쾌속감정오충상견곡매균적실시정량PCR진단기술,해방법특이도호、령민도고,부합림상수요,능위침습성진균감염(invasive aspergillosis,IA)제공신적선택.
