CAJ | 학술논문

目的在经典多柔比星肾病大鼠模型中动态观察其蛋白尿发生前后血管内皮生长因子(VEGF)分布和表达的时相变化,及其与足细胞裂孔隔膜关键分子nephrin磷酸化水平之间的关系,以深入了解VEGF在蛋白尿发生机制中的作用.方法 1.留取正常大鼠(对照组)及多柔比星肾病大鼠模型(肾病组)3、7、14和28 d肾皮质标本.2.应用免疫组织化学染色法观察对照组及28 d肾病组大鼠肾组织VEGF分布.3.提取对照组及3、7、14和28 d肾病组大鼠肾皮质总RNA,应用反转录获得cDNA,实时定量RT-PCR检测其VEGFmRNA表达.4.提取对照组及3、7、14和28 d肾病组大鼠肾皮质总蛋白,应用免疫蛋白印迹检测其VEGF蛋白表达.5.提取对照组及28 d肾病组大鼠.肾皮质总蛋白,应用免疫沉淀分析其nephrin酪氨酸磷酸化水平.6.采用SPSS 10.0软件进行统计学分析,各时间点肾病组与对照组间比较采用t检验.结果 1.免疫组织化学染色显示对照组大鼠肾小球VEGF的染色较深,主要分布于肾小球足细胞及近端小管上皮细胞,系膜区亦有少许表达.在28 d肾病组大鼠,VEGF在肾小球足细胞和系膜区的染色明显减弱.2.与对照组比较,3、7、14及28 d各时间点肾病组大鼠肾皮质VEGF的mRNA表达无显著性改变(Pa＞0.05).3.与对照组比较,肾病组大鼠肾皮质VEGF蛋白表达于注射多柔比星后7 d显著降低(P＜0.05),且在14 d和28 d 2个时间点亦显著低于对照组(Pa＜0.01).4.与对照组比较,28 d肾病组大鼠肾皮质nephrin磷酸化水平显著降低(P＜0.05).结论 VEGF表达降低可能参与了多柔比星肾病大鼠蛋白尿的发生,VEGF与裂孔隔膜关键分子nephrin的磷酸化水平可能存在联系,它们相互协调、相互作用,共同参与维护肾小球滤过屏障结构和功能的完整.
목적 재경전다유비성신병대서모형중동태관찰기단백뇨발생전후혈관내피생장인자(VEGF)분포화표체적시상변화,급기여족세포렬공격막관건분자nephrin린산화수평지간적관계,이심입료해VEGF재단백뇨발생궤제중적작용.방법 1.류취정상대서(대조조)급다유비성신병대서모형(신병조)3、7、14화28 d신피질표본.2.응용면역조직화학염색법관찰대조조급28 d신병조대서신조직VEGF분포.3.제취대조조급3、7、14화28 d신병조대서신피질총RNA,응용반전록획득cDNA,실시정량RT-PCR검측기VEGFmRNA표체.4.제취대조조급3、7、14화28 d신병조대서신피질총단백,응용면역단백인적검측기VEGF단백표체.5.제취대조조급28 d신병조대서.신피질총단백,응용면역침정분석기nephrin락안산린산화수평.6.채용SPSS 10.0연건진행통계학분석,각시간점신병조여대조조간비교채용t검험.결과 1.면역조직화학염색현시대조조대서신소구VEGF적염색교심,주요분포우신소구족세포급근단소관상피세포,계막구역유소허표체.재28 d신병조대서,VEGF재신소구족세포화계막구적염색명현감약.2.여대조조비교,3、7、14급28 d각시간점신병조대서신피질VEGF적mRNA표체무현저성개변(Pa＞0.05).3.여대조조비교,신병조대서신피질VEGF단백표체우주사다유비성후7 d현저강저(P＜0.05),차재14 d화28 d 2개시간점역현저저우대조조(Pa＜0.01).4.여대조조비교,28 d신병조대서신피질nephrin린산화수평현저강저(P＜0.05).결론 VEGF표체강저가능삼여료다유비성신병대서단백뇨적발생,VEGF여렬공격막관건분자nephrin적린산화수평가능존재련계,타문상호협조、상호작용,공동삼여유호신소구려과병장결구화공능적완정.