河南肿瘤学杂志
河南腫瘤學雜誌
하남종류학잡지
HENAN JOURNAL OF ONCOLOGY
2005年
3期
153-155
,共3页
许慧霞%李一冬%杨胜利%赵国强
許慧霞%李一鼕%楊勝利%趙國彊
허혜하%리일동%양성리%조국강
端粒酶逆转录酶%重组质粒%克隆表达%肿瘤免疫基因治疗
耑粒酶逆轉錄酶%重組質粒%剋隆錶達%腫瘤免疫基因治療
단립매역전록매%중조질립%극륭표체%종류면역기인치료
目的本课题拟观察原核重组质粒pGEX-4T-1-hTERT在BL21细菌中的表达,为进一步探讨以hTERT为靶点的肿瘤基因免疫治疗提供实验依据.方法IPTG诱导带有pGEX-4T-1-hTERT质粒的BL21细菌融合蛋白的表达,取不同时间的培养物进行SDS-PAGE分析,并进行薄层凝胶光密度扫描测定目的蛋白表达量,同时对表达产物进行Western-blot检测.结果对SDS-PAGE结果分析发现,含pGEX-4T-1-hTERT质粒的BL21细菌能够表达出63kD的融合蛋白.薄层凝胶光密度扫描测定其表达水平最高为28.4%,以IPTG诱导4 h表达量最高.Western-blot检测表明该融合蛋白可被hTERT多抗识别.结论诱导pGEX-4T-1-hTERT重组质粒,获得分子量为63kD的GST-hTERT融合蛋白.用抗hTERT目的基因片段表达的相应抗原蛋白.
目的本課題擬觀察原覈重組質粒pGEX-4T-1-hTERT在BL21細菌中的錶達,為進一步探討以hTERT為靶點的腫瘤基因免疫治療提供實驗依據.方法IPTG誘導帶有pGEX-4T-1-hTERT質粒的BL21細菌融閤蛋白的錶達,取不同時間的培養物進行SDS-PAGE分析,併進行薄層凝膠光密度掃描測定目的蛋白錶達量,同時對錶達產物進行Western-blot檢測.結果對SDS-PAGE結果分析髮現,含pGEX-4T-1-hTERT質粒的BL21細菌能夠錶達齣63kD的融閤蛋白.薄層凝膠光密度掃描測定其錶達水平最高為28.4%,以IPTG誘導4 h錶達量最高.Western-blot檢測錶明該融閤蛋白可被hTERT多抗識彆.結論誘導pGEX-4T-1-hTERT重組質粒,穫得分子量為63kD的GST-hTERT融閤蛋白.用抗hTERT目的基因片段錶達的相應抗原蛋白.
목적본과제의관찰원핵중조질립pGEX-4T-1-hTERT재BL21세균중적표체,위진일보탐토이hTERT위파점적종류기인면역치료제공실험의거.방법IPTG유도대유pGEX-4T-1-hTERT질립적BL21세균융합단백적표체,취불동시간적배양물진행SDS-PAGE분석,병진행박층응효광밀도소묘측정목적단백표체량,동시대표체산물진행Western-blot검측.결과대SDS-PAGE결과분석발현,함pGEX-4T-1-hTERT질립적BL21세균능구표체출63kD적융합단백.박층응효광밀도소묘측정기표체수평최고위28.4%,이IPTG유도4 h표체량최고.Western-blot검측표명해융합단백가피hTERT다항식별.결론유도pGEX-4T-1-hTERT중조질립,획득분자량위63kD적GST-hTERT융합단백.용항hTERT목적기인편단표체적상응항원단백.
