园艺学报
園藝學報
완예학보
ACTA HORTICULTURAE SINICA
2007年
2期
371-376
,共6页
潘夕春%陈敏%刘颜%廖志华
潘夕春%陳敏%劉顏%廖誌華
반석춘%진민%류안%료지화
番茄%5-磷酸脱氧木酮糖合成酶%克隆%番茄红素%颜色互补%发酵
番茄%5-燐痠脫氧木酮糖閤成酶%剋隆%番茄紅素%顏色互補%髮酵
번가%5-린산탈양목동당합성매%극륭%번가홍소%안색호보%발효
用RT-PCR(反转录-聚合酶链式反应)的方法从番茄中克隆到5-磷酸脱氧木酮糖合成酶(Deoxyoxylulose-5-phosphate synthase, DXS)基因编码区(记为ledxs),并构建了ledxs原核表达载体pTrcLeDXS.将携带番茄红素生物合成途径上香叶基香叶基焦磷酸合成酶(geranylgeranyl pyrophosphate synthase,crtE),八氢番茄红素合成酶 (phytoene synthase,crtB),八氢番茄红素脱饱和酶(phytoene desaturase,crtI)3个关键酶基因的原核表达载体pAC-LYC转入大肠杆菌XL1-Blue.将pTrcLeDXS转入该重组工程菌,获得番茄红素工程菌.将该菌用于构建颜色互补平板,并进行发酵培养以检测番茄红素表达量.颜色互补平板上的菌斑呈现鲜艳的红色.经过21 h的培养番茄红素的产量达到605.25 μg·L-1.结果显示:ledxs能明显推动类胡萝卜素途径向番茄红素合成的方向流动.
用RT-PCR(反轉錄-聚閤酶鏈式反應)的方法從番茄中剋隆到5-燐痠脫氧木酮糖閤成酶(Deoxyoxylulose-5-phosphate synthase, DXS)基因編碼區(記為ledxs),併構建瞭ledxs原覈錶達載體pTrcLeDXS.將攜帶番茄紅素生物閤成途徑上香葉基香葉基焦燐痠閤成酶(geranylgeranyl pyrophosphate synthase,crtE),八氫番茄紅素閤成酶 (phytoene synthase,crtB),八氫番茄紅素脫飽和酶(phytoene desaturase,crtI)3箇關鍵酶基因的原覈錶達載體pAC-LYC轉入大腸桿菌XL1-Blue.將pTrcLeDXS轉入該重組工程菌,穫得番茄紅素工程菌.將該菌用于構建顏色互補平闆,併進行髮酵培養以檢測番茄紅素錶達量.顏色互補平闆上的菌斑呈現鮮豔的紅色.經過21 h的培養番茄紅素的產量達到605.25 μg·L-1.結果顯示:ledxs能明顯推動類鬍蘿蔔素途徑嚮番茄紅素閤成的方嚮流動.
용RT-PCR(반전록-취합매련식반응)적방법종번가중극륭도5-린산탈양목동당합성매(Deoxyoxylulose-5-phosphate synthase, DXS)기인편마구(기위ledxs),병구건료ledxs원핵표체재체pTrcLeDXS.장휴대번가홍소생물합성도경상향협기향협기초린산합성매(geranylgeranyl pyrophosphate synthase,crtE),팔경번가홍소합성매 (phytoene synthase,crtB),팔경번가홍소탈포화매(phytoene desaturase,crtI)3개관건매기인적원핵표체재체pAC-LYC전입대장간균XL1-Blue.장pTrcLeDXS전입해중조공정균,획득번가홍소공정균.장해균용우구건안색호보평판,병진행발효배양이검측번가홍소표체량.안색호보평판상적균반정현선염적홍색.경과21 h적배양번가홍소적산량체도605.25 μg·L-1.결과현시:ledxs능명현추동류호라복소도경향번가홍소합성적방향류동.
