微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2008年
5期
672-676
,共5页
师永霞%曾少灵%袁美妗%孙钒%庞义
師永霞%曾少靈%袁美妗%孫釩%龐義
사영하%증소령%원미금%손범%방의
苏云金芽孢杆菌%分子伴侣%p19基因%orf1-orf2基因%晶体蛋白Cry11Aa
囌雲金芽孢桿菌%分子伴侶%p19基因%orf1-orf2基因%晶體蛋白Cry11Aa
소운금아포간균%분자반려%p19기인%orf1-orf2기인%정체단백Cry11Aa
[目的]分析苏云金芽孢杆菌的cry2A型芽孢期启动子对晶体蛋白Cry11Aa的协调作用和分子伴侣ORF1-ORF2对Cry11Aa表达的促进功能.[方法]3个包括cry11Aa编码区的重组质粒pHcy1、pHcy2和pHcy4被构建并电激转化到苏云金芽孢杆菌晶体缺陷株4Q7中,其中pHcy1质粒携带cry11Aa基因自身启动子和分子伴侣p19基因,pHcy2携带cry2A型芽孢期启动子和分子伴侣orf1-orf2基因,pHcy4质粒在pHcy1的上游插入了cry2A型芽孢期启动子和分子伴侣orf1-orf2基因.SDS-PAGE分析了Cry11Aa蛋白在各重组苏云金菌株中的表达情况,并通过生物测定确定了其对蚊虫的生物活性.[结果]SDS-PAGE结果表明,Cry11Aa蛋白在4Q7(pHcy1)和4QT(pHcy4)均获得了表达,在4Q7(pHcy2)中未检测到Cry11Aa蛋白,推测晶体蛋白Cry11A不能利用cry2A型启动子进行表达调控;Cry11Aa蛋白在等体积4Q7(pHcy4)培养液中的表达量是4Q7(pHcy1)菌株的1.25倍,暗示着分子伴侣ORF1-ORF2在某种程度上能提高Cry11Aa的蛋白表达量.4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy4)形成的Cry11Aa蛋白晶体的形状和大小相似,两者对致倦库蚊的生物活性没有明显差异,LC50s分别为59.33 ng/mL和66.21 ng/mL,.[结论]推测晶体蛋白Cry11A能否成功表达与其使用启动子的类型和两者的协调配合有关.分子伴侣ORF1-ORF2虽然在某种程度上能提高Cry11Aa的蛋白表达量,但对提高Cry11Aa蛋白的杀蚊毒力没有显著性帮助.
[目的]分析囌雲金芽孢桿菌的cry2A型芽孢期啟動子對晶體蛋白Cry11Aa的協調作用和分子伴侶ORF1-ORF2對Cry11Aa錶達的促進功能.[方法]3箇包括cry11Aa編碼區的重組質粒pHcy1、pHcy2和pHcy4被構建併電激轉化到囌雲金芽孢桿菌晶體缺陷株4Q7中,其中pHcy1質粒攜帶cry11Aa基因自身啟動子和分子伴侶p19基因,pHcy2攜帶cry2A型芽孢期啟動子和分子伴侶orf1-orf2基因,pHcy4質粒在pHcy1的上遊插入瞭cry2A型芽孢期啟動子和分子伴侶orf1-orf2基因.SDS-PAGE分析瞭Cry11Aa蛋白在各重組囌雲金菌株中的錶達情況,併通過生物測定確定瞭其對蚊蟲的生物活性.[結果]SDS-PAGE結果錶明,Cry11Aa蛋白在4Q7(pHcy1)和4QT(pHcy4)均穫得瞭錶達,在4Q7(pHcy2)中未檢測到Cry11Aa蛋白,推測晶體蛋白Cry11A不能利用cry2A型啟動子進行錶達調控;Cry11Aa蛋白在等體積4Q7(pHcy4)培養液中的錶達量是4Q7(pHcy1)菌株的1.25倍,暗示著分子伴侶ORF1-ORF2在某種程度上能提高Cry11Aa的蛋白錶達量.4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy4)形成的Cry11Aa蛋白晶體的形狀和大小相似,兩者對緻倦庫蚊的生物活性沒有明顯差異,LC50s分彆為59.33 ng/mL和66.21 ng/mL,.[結論]推測晶體蛋白Cry11A能否成功錶達與其使用啟動子的類型和兩者的協調配閤有關.分子伴侶ORF1-ORF2雖然在某種程度上能提高Cry11Aa的蛋白錶達量,但對提高Cry11Aa蛋白的殺蚊毒力沒有顯著性幫助.
[목적]분석소운금아포간균적cry2A형아포기계동자대정체단백Cry11Aa적협조작용화분자반려ORF1-ORF2대Cry11Aa표체적촉진공능.[방법]3개포괄cry11Aa편마구적중조질립pHcy1、pHcy2화pHcy4피구건병전격전화도소운금아포간균정체결함주4Q7중,기중pHcy1질립휴대cry11Aa기인자신계동자화분자반려p19기인,pHcy2휴대cry2A형아포기계동자화분자반려orf1-orf2기인,pHcy4질립재pHcy1적상유삽입료cry2A형아포기계동자화분자반려orf1-orf2기인.SDS-PAGE분석료Cry11Aa단백재각중조소운금균주중적표체정황,병통과생물측정학정료기대문충적생물활성.[결과]SDS-PAGE결과표명,Cry11Aa단백재4Q7(pHcy1)화4QT(pHcy4)균획득료표체,재4Q7(pHcy2)중미검측도Cry11Aa단백,추측정체단백Cry11A불능이용cry2A형계동자진행표체조공;Cry11Aa단백재등체적4Q7(pHcy4)배양액중적표체량시4Q7(pHcy1)균주적1.25배,암시착분자반려ORF1-ORF2재모충정도상능제고Cry11Aa적단백표체량.4Q7(pHcy1)화4Q7(pHcy4)형성적Cry11Aa단백정체적형상화대소상사,량자대치권고문적생물활성몰유명현차이,LC50s분별위59.33 ng/mL화66.21 ng/mL,.[결론]추측정체단백Cry11A능부성공표체여기사용계동자적류형화량자적협조배합유관.분자반려ORF1-ORF2수연재모충정도상능제고Cry11Aa적단백표체량,단대제고Cry11Aa단백적살문독력몰유현저성방조.
