中南林业科技大学学报
中南林業科技大學學報
중남임업과기대학학보
JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY OF FORESTRY & TECHNOLOGY
2009年
1期
6-9,31
,共5页
王义强%谭晓风%陈介南%周小慧%孙吉康
王義彊%譚曉風%陳介南%週小慧%孫吉康
왕의강%담효풍%진개남%주소혜%손길강
经济林学%cDNA文库%构建%银杏%雌树%成熟叶
經濟林學%cDNA文庫%構建%銀杏%雌樹%成熟葉
경제림학%cDNA문고%구건%은행%자수%성숙협
银杏是第四纪冰川时期孑遗的现存地球最古老的植物,为我国特有的经济树种.银杏cDNA文库的构建有助于其分子生物学研究进一步深入.以湖南银杏梅核品种优良单株成熟叶为材料,经变性裂解液分解细胞,提取总RNA,Oligotex mRNA midi kit分离纯化出mRNA,用Superscipt TM Ⅰ RnaseH2 Reverse Transcriptase将其反转录成cDNA.与EcoRI接头连接后插入pBluescriptⅡ SK(十)XR载体,电转化感受态细胞DH10B中,进行菌落PCR文库质量检测.结果表明:文库总库容量为8.12×106克隆子,重组率为90%,文库插入片段长度约为500～2 000 bp.构建的银杏雌树成熟叶cDNA文库符合标准,该文库为进一步构建银杏EST文库、筛选目的基因及基因芯片制备等提供了资源基础和有效工具.
銀杏是第四紀冰川時期孑遺的現存地毬最古老的植物,為我國特有的經濟樹種.銀杏cDNA文庫的構建有助于其分子生物學研究進一步深入.以湖南銀杏梅覈品種優良單株成熟葉為材料,經變性裂解液分解細胞,提取總RNA,Oligotex mRNA midi kit分離純化齣mRNA,用Superscipt TM Ⅰ RnaseH2 Reverse Transcriptase將其反轉錄成cDNA.與EcoRI接頭連接後插入pBluescriptⅡ SK(十)XR載體,電轉化感受態細胞DH10B中,進行菌落PCR文庫質量檢測.結果錶明:文庫總庫容量為8.12×106剋隆子,重組率為90%,文庫插入片段長度約為500～2 000 bp.構建的銀杏雌樹成熟葉cDNA文庫符閤標準,該文庫為進一步構建銀杏EST文庫、篩選目的基因及基因芯片製備等提供瞭資源基礎和有效工具.
은행시제사기빙천시기혈유적현존지구최고로적식물,위아국특유적경제수충.은행cDNA문고적구건유조우기분자생물학연구진일보심입.이호남은행매핵품충우량단주성숙협위재료,경변성렬해액분해세포,제취총RNA,Oligotex mRNA midi kit분리순화출mRNA,용Superscipt TM Ⅰ RnaseH2 Reverse Transcriptase장기반전록성cDNA.여EcoRI접두련접후삽입pBluescriptⅡ SK(십)XR재체,전전화감수태세포DH10B중,진행균락PCR문고질량검측.결과표명:문고총고용량위8.12×106극륭자,중조솔위90%,문고삽입편단장도약위500～2 000 bp.구건적은행자수성숙협cDNA문고부합표준,해문고위진일보구건은행EST문고、사선목적기인급기인심편제비등제공료자원기출화유효공구.
