世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2009年
10期
981-984
,共4页
Fas相关死亡结构域蛋白%真核表达%绿色荧光蛋白%稳定转染
Fas相關死亡結構域蛋白%真覈錶達%綠色熒光蛋白%穩定轉染
Fas상관사망결구역단백%진핵표체%록색형광단백%은정전염
目的: 构建真核表达载体pEGFP-N1-FADD并检测其在结肠癌细胞株SW480中的表达.方法: 设计人FADD特异性引物, 从人结肠癌细胞SW480细胞提取总RNA, 通过RT-PCR方法获取人FADD全长cDNA, 定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1. 应用PCR、酶切和DNA测序进行鉴定, 确认后转染人结肠癌细胞SW480.G418抗性筛选获得FADD稳定表达细胞克隆,应用Western blot检测FADD的表达水平.结果: 测序及酶切鉴定证明获得人全长FADD基因, FADD基因正确插入pEGFP-N1中, 在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白在SW480细胞中的稳定表达, Western blot检测结果显示稳定转染pEGFP-N1-FADD的细胞FADD表达水平增高, 是未转染细胞的2.34倍.结论: 成功构建真核表达载体pEGF P-N1-FADD, 并且在SW480细胞中稳定表达.
目的: 構建真覈錶達載體pEGFP-N1-FADD併檢測其在結腸癌細胞株SW480中的錶達.方法: 設計人FADD特異性引物, 從人結腸癌細胞SW480細胞提取總RNA, 通過RT-PCR方法穫取人FADD全長cDNA, 定嚮剋隆至真覈錶達載體pEGFP-N1. 應用PCR、酶切和DNA測序進行鑒定, 確認後轉染人結腸癌細胞SW480.G418抗性篩選穫得FADD穩定錶達細胞剋隆,應用Western blot檢測FADD的錶達水平.結果: 測序及酶切鑒定證明穫得人全長FADD基因, FADD基因正確插入pEGFP-N1中, 在熒光顯微鏡下觀察到綠色熒光蛋白在SW480細胞中的穩定錶達, Western blot檢測結果顯示穩定轉染pEGFP-N1-FADD的細胞FADD錶達水平增高, 是未轉染細胞的2.34倍.結論: 成功構建真覈錶達載體pEGF P-N1-FADD, 併且在SW480細胞中穩定錶達.
목적: 구건진핵표체재체pEGFP-N1-FADD병검측기재결장암세포주SW480중적표체.방법: 설계인FADD특이성인물, 종인결장암세포SW480세포제취총RNA, 통과RT-PCR방법획취인FADD전장cDNA, 정향극륭지진핵표체재체pEGFP-N1. 응용PCR、매절화DNA측서진행감정, 학인후전염인결장암세포SW480.G418항성사선획득FADD은정표체세포극륭,응용Western blot검측FADD적표체수평.결과: 측서급매절감정증명획득인전장FADD기인, FADD기인정학삽입pEGFP-N1중, 재형광현미경하관찰도록색형광단백재SW480세포중적은정표체, Western blot검측결과현시은정전염pEGFP-N1-FADD적세포FADD표체수평증고, 시미전염세포적2.34배.결론: 성공구건진핵표체재체pEGF P-N1-FADD, 병차재SW480세포중은정표체.
