泸州医学院学报
瀘州醫學院學報
로주의학원학보
JOURNAL OF LUZHOU MEDICAL COLLEGE
2011年
5期
480-482
,共3页
Doxycline%DLX4%稳定细胞系%蛋白质表达%诱导
Doxycline%DLX4%穩定細胞繫%蛋白質錶達%誘導
Doxycline%DLX4%은정세포계%단백질표체%유도
目的:建立一种可诱导稳定表达方法,并构建DLX4细胞系.分析DLX4细胞系的表达调控.方法:将DLX4全长基因克隆入pcDNA5/FRT/TO表达载体,将其转染入宿主细胞Flp-InTMT-RExTM-293细胞系,潮霉素B筛选或者阳性克隆.采用不同剂量的DOX或者不同作用时间对pcDNA5/DLX4细胞系进行诱导表达,用Western blotting检测DLX4表达情况.结果:构建了可被Doxycline (DOX)诱导的稳定表达pcDNA5/DLX4的细胞系.0.001μg/ml的DOX即可诱导pcDNA5/DLX4细胞系的表达,0.1 μg/ml DOX即可诱导该细胞系表达达到高峰；DOX对该细胞系作用1h后即可诱导该细胞系表达,对其作用16h后该细胞系表达明显增强.结论:构建了可被DOX诱导稳定表达的DLX4细胞系,不同剂量的DOX和不同作用时间对DLX4细胞系表达有不同的影响.该细胞系的建立为深入探索DLX4的功能提供了一种新的有效方法和实验材料.
目的:建立一種可誘導穩定錶達方法,併構建DLX4細胞繫.分析DLX4細胞繫的錶達調控.方法:將DLX4全長基因剋隆入pcDNA5/FRT/TO錶達載體,將其轉染入宿主細胞Flp-InTMT-RExTM-293細胞繫,潮黴素B篩選或者暘性剋隆.採用不同劑量的DOX或者不同作用時間對pcDNA5/DLX4細胞繫進行誘導錶達,用Western blotting檢測DLX4錶達情況.結果:構建瞭可被Doxycline (DOX)誘導的穩定錶達pcDNA5/DLX4的細胞繫.0.001μg/ml的DOX即可誘導pcDNA5/DLX4細胞繫的錶達,0.1 μg/ml DOX即可誘導該細胞繫錶達達到高峰；DOX對該細胞繫作用1h後即可誘導該細胞繫錶達,對其作用16h後該細胞繫錶達明顯增彊.結論:構建瞭可被DOX誘導穩定錶達的DLX4細胞繫,不同劑量的DOX和不同作用時間對DLX4細胞繫錶達有不同的影響.該細胞繫的建立為深入探索DLX4的功能提供瞭一種新的有效方法和實驗材料.
목적:건립일충가유도은정표체방법,병구건DLX4세포계.분석DLX4세포계적표체조공.방법:장DLX4전장기인극륭입pcDNA5/FRT/TO표체재체,장기전염입숙주세포Flp-InTMT-RExTM-293세포계,조매소B사선혹자양성극륭.채용불동제량적DOX혹자불동작용시간대pcDNA5/DLX4세포계진행유도표체,용Western blotting검측DLX4표체정황.결과:구건료가피Doxycline (DOX)유도적은정표체pcDNA5/DLX4적세포계.0.001μg/ml적DOX즉가유도pcDNA5/DLX4세포계적표체,0.1 μg/ml DOX즉가유도해세포계표체체도고봉；DOX대해세포계작용1h후즉가유도해세포계표체,대기작용16h후해세포계표체명현증강.결론:구건료가피DOX유도은정표체적DLX4세포계,불동제량적DOX화불동작용시간대DLX4세포계표체유불동적영향.해세포계적건립위심입탐색DLX4적공능제공료일충신적유효방법화실험재료.
