CAJ | 학술논문

目的研究建立人B细胞激活因子(BlyS)mRNA荧光定量检测方法,探讨正常人外周血单个核细胞(PBMC)中BlyS基因表达水平.方法基于TaqMan荧光探针技术,构建克隆载体pMD18-T-BlyS作为定量模板,在GeneAmp 5700型检测仪上,通过荧光强度达到一定阈值时的循环数来定量起始模板,以建立实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法;并对20名健康献血者外周血中BlyS表达进行检测.结果FQ-RT-PCR的动态检测范围为104～109拷贝/μg RNA(r≥0.996),内参三磷酸甘油醛脱氢酶的动态检测范围为103～108拷贝/μg RNA(r≥0.998);低值的批内、批间的重复性分别为17.7%和24.3%,高值的批内、批间的重复性分别为5.3%和8.1%;20名献血员健康外周血的PBMC中均有BlyS mRNA的表达,范围为5.5×104～4.9×105拷贝/μg,均值为(1.7±1.4)×105拷贝/μg.结论成功建立人BlyS基因表达FQ-PCR检测方法,检测结果定量准确可靠,可用于BlyS基因表达与自身免疫性疾病发病机制的关系研究.
목적연구건립인B세포격활인자(BlyS)mRNA형광정량검측방법,탐토정상인외주혈단개핵세포(PBMC)중BlyS기인표체수평.방법기우TaqMan형광탐침기술,구건극륭재체pMD18-T-BlyS작위정량모판,재GeneAmp 5700형검측의상,통과형광강도체도일정역치시적순배수래정량기시모판,이건립실시형광정량역전록취합매련반응(FQ-RT-PCR)방법;병대20명건강헌혈자외주혈중BlyS표체진행검측.결과FQ-RT-PCR적동태검측범위위104～109고패/μg RNA(r≥0.996),내삼삼린산감유철탈경매적동태검측범위위103～108고패/μg RNA(r≥0.998);저치적비내、비간적중복성분별위17.7%화24.3%,고치적비내、비간적중복성분별위5.3%화8.1%;20명헌혈원건강외주혈적PBMC중균유BlyS mRNA적표체,범위위5.5×104～4.9×105고패/μg,균치위(1.7±1.4)×105고패/μg.결론성공건립인BlyS기인표체FQ-PCR검측방법,검측결과정량준학가고,가용우BlyS기인표체여자신면역성질병발병궤제적관계연구.