中华血液学杂志
中華血液學雜誌
중화혈액학잡지
Chinese Journal of Hematology
2012年
5期
412-416
,共5页
张弘%杨良春%曹励之%杨明华%谢岷%朱珊%曾佩%俞燕
張弘%楊良春%曹勵之%楊明華%謝岷%硃珊%曾珮%俞燕
장홍%양량춘%조려지%양명화%사민%주산%증패%유연
基因,PTEN%K562/ADM细胞%自噬%凋亡%耐药性%基因转染
基因,PTEN%K562/ADM細胞%自噬%凋亡%耐藥性%基因轉染
기인,PTEN%K562/ADM세포%자서%조망%내약성%기인전염
目的 探讨上凋PTEN表达对白血病耐药细胞化疗增敏的作用及其机制.方法 将PTEN真核表达质粒导入耐阿霉素(ADM)的K562细胞(K562/ADM细胞)中,采用Western blot和RTPCR方法检测PTEN基因在转染前后细胞的表达,MTT法检测ADM对转染前后K562/ADM细胞存活率的影响,应用流式细胞术检测细胞凋亡百分率,采用重组人半胱天冬酶-3(caspase-3)活性定量试剂盒分析caspase-3的活性,Western blot检测自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)-I/Ⅱ、自噬相关蛋白Beelinl、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化40S核糖体蛋白6s激酶(p-p70S6K)的表达,单丹磺酰戊二胺(MDC)染色和透视电镜观察自噬泡的情况.结果 ①与未经处理和转染空载体的K562/ADM细胞相比,转染PTEN基因的K562/ADM细胞组PTEN mRNA和蛋白表达水平均增高;②转染PTEN基因使K562/ADM细胞对ADM的敏感性增强,与转染空载体细胞比较,其细胞存活率从(94.07±2.60)%降低到(53.83±4.20)%,细胞凋亡率从(11.89±1.70)%增加到(43.69±2.30)%;经caspase-3抑制剂(Z-DEVE-FMK)预处理后,未能完全阻止ADM对细胞的毒性作用;③ADM处理细胞12和24 h后,转染PTEN基因的K562/ADM细胞casepase-3活性(2.27±0.13和3.15±0.08)均明显高于转染空载体组(1.19±0.14和1.48±0.06)(P值均<0.05);④与转染空载体组比较,转染PTEN基因的K562/ADM细胞LC3-Ⅱ和Beclinl的蛋白表达水平分别增加83%和18%,p-Akt和p-p70S6K的蛋白表达水平分别降低96%和87%;⑤增加PTEN的表达,细胞内自噬泡较转染空载体组明显增多.结论 上调PTEN基因表达能明显增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性,该作用可能与上调PTEN基因表达、抑制P13K/AkL/mTOR通路活性从而促进细胞凋亡和自噬的发生有关.
目的 探討上凋PTEN錶達對白血病耐藥細胞化療增敏的作用及其機製.方法 將PTEN真覈錶達質粒導入耐阿黴素(ADM)的K562細胞(K562/ADM細胞)中,採用Western blot和RTPCR方法檢測PTEN基因在轉染前後細胞的錶達,MTT法檢測ADM對轉染前後K562/ADM細胞存活率的影響,應用流式細胞術檢測細胞凋亡百分率,採用重組人半胱天鼕酶-3(caspase-3)活性定量試劑盒分析caspase-3的活性,Western blot檢測自噬微管相關蛋白輕鏈3(LC3)-I/Ⅱ、自噬相關蛋白Beelinl、燐痠化蛋白激酶B(p-Akt)和燐痠化40S覈糖體蛋白6s激酶(p-p70S6K)的錶達,單丹磺酰戊二胺(MDC)染色和透視電鏡觀察自噬泡的情況.結果 ①與未經處理和轉染空載體的K562/ADM細胞相比,轉染PTEN基因的K562/ADM細胞組PTEN mRNA和蛋白錶達水平均增高;②轉染PTEN基因使K562/ADM細胞對ADM的敏感性增彊,與轉染空載體細胞比較,其細胞存活率從(94.07±2.60)%降低到(53.83±4.20)%,細胞凋亡率從(11.89±1.70)%增加到(43.69±2.30)%;經caspase-3抑製劑(Z-DEVE-FMK)預處理後,未能完全阻止ADM對細胞的毒性作用;③ADM處理細胞12和24 h後,轉染PTEN基因的K562/ADM細胞casepase-3活性(2.27±0.13和3.15±0.08)均明顯高于轉染空載體組(1.19±0.14和1.48±0.06)(P值均<0.05);④與轉染空載體組比較,轉染PTEN基因的K562/ADM細胞LC3-Ⅱ和Beclinl的蛋白錶達水平分彆增加83%和18%,p-Akt和p-p70S6K的蛋白錶達水平分彆降低96%和87%;⑤增加PTEN的錶達,細胞內自噬泡較轉染空載體組明顯增多.結論 上調PTEN基因錶達能明顯增加K562/ADM細胞對ADM的敏感性,該作用可能與上調PTEN基因錶達、抑製P13K/AkL/mTOR通路活性從而促進細胞凋亡和自噬的髮生有關.
목적 탐토상조PTEN표체대백혈병내약세포화료증민적작용급기궤제.방법 장PTEN진핵표체질립도입내아매소(ADM)적K562세포(K562/ADM세포)중,채용Western blot화RTPCR방법검측PTEN기인재전염전후세포적표체,MTT법검측ADM대전염전후K562/ADM세포존활솔적영향,응용류식세포술검측세포조망백분솔,채용중조인반광천동매-3(caspase-3)활성정량시제합분석caspase-3적활성,Western blot검측자서미관상관단백경련3(LC3)-I/Ⅱ、자서상관단백Beelinl、린산화단백격매B(p-Akt)화린산화40S핵당체단백6s격매(p-p70S6K)적표체,단단광선무이알(MDC)염색화투시전경관찰자서포적정황.결과 ①여미경처리화전염공재체적K562/ADM세포상비,전염PTEN기인적K562/ADM세포조PTEN mRNA화단백표체수평균증고;②전염PTEN기인사K562/ADM세포대ADM적민감성증강,여전염공재체세포비교,기세포존활솔종(94.07±2.60)%강저도(53.83±4.20)%,세포조망솔종(11.89±1.70)%증가도(43.69±2.30)%;경caspase-3억제제(Z-DEVE-FMK)예처리후,미능완전조지ADM대세포적독성작용;③ADM처리세포12화24 h후,전염PTEN기인적K562/ADM세포casepase-3활성(2.27±0.13화3.15±0.08)균명현고우전염공재체조(1.19±0.14화1.48±0.06)(P치균<0.05);④여전염공재체조비교,전염PTEN기인적K562/ADM세포LC3-Ⅱ화Beclinl적단백표체수평분별증가83%화18%,p-Akt화p-p70S6K적단백표체수평분별강저96%화87%;⑤증가PTEN적표체,세포내자서포교전염공재체조명현증다.결론 상조PTEN기인표체능명현증가K562/ADM세포대ADM적민감성,해작용가능여상조PTEN기인표체、억제P13K/AkL/mTOR통로활성종이촉진세포조망화자서적발생유관.
