畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2007年
12期
58-60
,共3页
阳玉梅%郑小龙%黄维义%石云良%代华龙%张为宇
暘玉梅%鄭小龍%黃維義%石雲良%代華龍%張為宇
양옥매%정소룡%황유의%석운량%대화룡%장위우
沼泽型水牛%IL-18%TNF-α%基因克隆%序列分析
沼澤型水牛%IL-18%TNF-α%基因剋隆%序列分析
소택형수우%IL-18%TNF-α%기인극륭%서렬분석
从健康沼泽型水牛静脉无菌采血,分离外周血单核细胞(PBMCs),用刀豆素A(ConA)诱导培养3,8和12 h后,提取细胞总RNA,以Oligo(dT)18为引物合成第一链cDNA,根据牛的白细胞介素18(IL-18)和绵羊的肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因序列设计2对特异性引物,通过PCR方法扩增出水牛IL-18和TNF-α基因,将其克隆到pMD18-T载体,测序后进行序列分析.结果试验中所克隆到的IL-18和TNF-α基因序列的开放阅读框(ORF)分别为602 bp和715 bp,与GenBank所登录的水牛IL-18和TNF-α核苷酸序列同源性为99.1%和99.7%,其推导的氨基酸序列同源性分别是99.0%和98.7%.表明成功从水牛外周血中克隆到了水牛IL-18和TNF-α基因.
從健康沼澤型水牛靜脈無菌採血,分離外週血單覈細胞(PBMCs),用刀豆素A(ConA)誘導培養3,8和12 h後,提取細胞總RNA,以Oligo(dT)18為引物閤成第一鏈cDNA,根據牛的白細胞介素18(IL-18)和綿羊的腫瘤壞死因子α(TNF-α)基因序列設計2對特異性引物,通過PCR方法擴增齣水牛IL-18和TNF-α基因,將其剋隆到pMD18-T載體,測序後進行序列分析.結果試驗中所剋隆到的IL-18和TNF-α基因序列的開放閱讀框(ORF)分彆為602 bp和715 bp,與GenBank所登錄的水牛IL-18和TNF-α覈苷痠序列同源性為99.1%和99.7%,其推導的氨基痠序列同源性分彆是99.0%和98.7%.錶明成功從水牛外週血中剋隆到瞭水牛IL-18和TNF-α基因.
종건강소택형수우정맥무균채혈,분리외주혈단핵세포(PBMCs),용도두소A(ConA)유도배양3,8화12 h후,제취세포총RNA,이Oligo(dT)18위인물합성제일련cDNA,근거우적백세포개소18(IL-18)화면양적종류배사인자α(TNF-α)기인서렬설계2대특이성인물,통과PCR방법확증출수우IL-18화TNF-α기인,장기극륭도pMD18-T재체,측서후진행서렬분석.결과시험중소극륭도적IL-18화TNF-α기인서렬적개방열독광(ORF)분별위602 bp화715 bp,여GenBank소등록적수우IL-18화TNF-α핵감산서렬동원성위99.1%화99.7%,기추도적안기산서렬동원성분별시99.0%화98.7%.표명성공종수우외주혈중극륭도료수우IL-18화TNF-α기인.
