CAJ | 학술논문

实验目的是在乳酸菌中表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)中性粒细胞激活蛋白(NAP),口服免疫小鼠后检测其免疫原性.在实验中利用了分子克隆技术构建携带nap基因的重组原核表达质粒pNICE:sec-nap,将重组质粒转化乳酸菌NZ9000株,筛选鉴定阳性菌落,诱导表达的NAP蛋白用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.将雌性ICR (CV级)小鼠随机分为4组,分别用PBS、携带空质粒的乳酸菌、携带pNICE:sec-nap的乳酸菌、灭活的H.pylori灌胃.免疫7次后检测其特异性IgG和IgA的产生.成功扩增了nap 基因并构建了重组原核表达质粒pNICE:sec-nap,转化乳酸菌NZ9000后经nisin诱导可表达Mr约17kDa的重组蛋白,表达量约占菌体总蛋白量的9.5%,表达的蛋白能与兔抗H.pylori 血清特异性反应,具有良好的免疫原性.携带pNICE:sec-nap质粒的乳酸菌刺激产生的IgG 水平明显高于携带空质粒组,与灭活H.pylori组没有明显的差异,但其刺激产生的IgA水平明显高于其他组.结果说明表达NAP蛋白的乳酸菌口服免疫小鼠后,能够刺激小鼠产生特异的IgG和IgA,对幽门螺杆菌疫苗的研究开发具有理论的意义.为乳酸菌作为抗原递送载体的研究和H.pylori口服疫苗的开发提供一定的实验基础.
실험목적시재유산균중표체유문라간균(Helicobacter pylori,H.pylori)중성립세포격활단백(NAP),구복면역소서후검측기면역원성.재실험중이용료분자극륭기술구건휴대nap기인적중조원핵표체질립pNICE:sec-nap,장중조질립전화유산균NZ9000주,사선감정양성균락,유도표체적NAP단백용SDS-PAGE화Western blot진행감정.장자성ICR (CV급)소서수궤분위4조,분별용PBS、휴대공질립적유산균、휴대pNICE:sec-nap적유산균、멸활적H.pylori관위.면역7차후검측기특이성IgG화IgA적산생.성공확증료nap 기인병구건료중조원핵표체질립pNICE:sec-nap,전화유산균NZ9000후경nisin유도가표체Mr약17kDa적중조단백,표체량약점균체총단백량적9.5%,표체적단백능여토항H.pylori 혈청특이성반응,구유량호적면역원성.휴대pNICE:sec-nap질립적유산균자격산생적IgG 수평명현고우휴대공질립조,여멸활H.pylori조몰유명현적차이,단기자격산생적IgA수평명현고우기타조.결과설명표체NAP단백적유산균구복면역소서후,능구자격소서산생특이적IgG화IgA,대유문라간균역묘적연구개발구유이론적의의.위유산균작위항원체송재체적연구화H.pylori구복역묘적개발제공일정적실험기출.