CAJ | 학술논문

目的建立调控因素存在下表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶的转基因小鼠.方法采用分子克隆技术构建可受Tet-On调控系统和Cre-LoxP基因敲除系统双重调控表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的真核表达质粒PBI-Ⅲ/LoxP-Luc-PolyA-LoxP-NS3/4A.该重组质粒线性化后,经显微注射制备转基因小鼠.首建鼠及经PCR检测阳性的子代鼠与C57BL/6小鼠交配传代.选择部分F2鼠与已经稳定建系的转基因小鼠Lap杂交,利用在体生物发光成像系统(BLI)检测肝脏稳定表达荧光素酶(Luc)报告基因的经盐酸强力霉素(Dox)诱导的双转基因子代鼠,并选择性针对稳定表达系传代扩群.结果酶切鉴定和测序分析显示重组载体构建成功.经PCR检测得到6只转基因首建鼠,其中3只可繁殖传代并持续检测到阳性子代鼠.BLI结果显示,由其中1只首建鼠传代而来的不同F2鼠与Lap鼠杂交得到的部分双转基因鼠肝脏部位发光信号强烈,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达.结论建立了转基因小鼠NS3/4A,并筛选到调控因素存在时转入外源基因特异稳定表达的转基因小鼠,为进一步建立严格调控型表达NS3/4A蛋白酶的小鼠模型奠定基础.
목적 건립조공인소존재하표체병형간염병독(HCV)NS3/4A사안산단백매적전기인소서.방법 채용분자극륭기술구건가수Tet-On조공계통화Cre-LoxP기인고제계통쌍중조공표체HCV NS3/4A사안산단백매적진핵표체질립PBI-Ⅲ/LoxP-Luc-PolyA-LoxP-NS3/4A.해중조질립선성화후,경현미주사제비전기인소서.수건서급경PCR검측양성적자대서여C57BL/6소서교배전대.선택부분F2서여이경은정건계적전기인소서Lap잡교,이용재체생물발광성상계통(BLI)검측간장은정표체형광소매(Luc)보고기인적경염산강력매소(Dox)유도적쌍전기인자대서,병선택성침대은정표체계전대확군.결과 매절감정화측서분석현시중조재체구건성공.경PCR검측득도6지전기인수건서,기중3지가번식전대병지속검측도양성자대서.BLI결과 현시,유기중1지수건서전대이래적불동F2서여Lap서잡교득도적부분쌍전기인서간장부위발광신호강렬,표명저사소서간세포내보고기인Luc특이고효표체.결론 건립료전기인소서NS3/4A,병사선도조공인소존재시전입외원기인특이은정표체적전기인소서,위진일보건립엄격조공형표체NS3/4A단백매적소서모형전정기출.