中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2011年
9期
775-778
,共4页
郭凯文%邱文洪%许楚娟%易路阳
郭凱文%邱文洪%許楚娟%易路暘
곽개문%구문홍%허초연%역로양
Gal-9%构建%表达%真核表达载体
Gal-9%構建%錶達%真覈錶達載體
Gal-9%구건%표체%진핵표체재체
目的:构建β-半乳糖苷结合凝集素-9(Gal-9)的真核表达载体,在CHO细胞中表达,并检测其表达.方法:通过DNA重组技术和PCR方法从人外周血单个核细胞克隆Gal-9基因,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,通过PCR、酶切及测序鉴定重组载体的正确性;采用脂质体转染技术将重组质粒pGal-9瞬时转染CHO细胞,通过Western blot和RT-PCR方法检测Gal-9的表达,MTT法检测Gal-9对同种异体淋巴细胞增殖的影响.结果:DNA测序和酶切鉴定证明Gal-9基因正确克隆至pcDNA3.1(+)的多克隆位点;以重组质粒pGal-9瞬时转染CHO细胞,通过Western blot和RT-PCR方法,在分子和蛋白水平证实Gal-9的表达,MTT法检测显示,Gal-9明显抑制同种异体淋巴细胞增殖反应,平均抑制率达85.43%.结论:成功构建pGal-9的真核表达载体,证实其在CHO细胞中可以成功表达,并抑制同种异体淋巴细胞增殖反应.
目的:構建β-半乳糖苷結閤凝集素-9(Gal-9)的真覈錶達載體,在CHO細胞中錶達,併檢測其錶達.方法:通過DNA重組技術和PCR方法從人外週血單箇覈細胞剋隆Gal-9基因,插入真覈錶達載體pcDNA3.1(+)中,通過PCR、酶切及測序鑒定重組載體的正確性;採用脂質體轉染技術將重組質粒pGal-9瞬時轉染CHO細胞,通過Western blot和RT-PCR方法檢測Gal-9的錶達,MTT法檢測Gal-9對同種異體淋巴細胞增殖的影響.結果:DNA測序和酶切鑒定證明Gal-9基因正確剋隆至pcDNA3.1(+)的多剋隆位點;以重組質粒pGal-9瞬時轉染CHO細胞,通過Western blot和RT-PCR方法,在分子和蛋白水平證實Gal-9的錶達,MTT法檢測顯示,Gal-9明顯抑製同種異體淋巴細胞增殖反應,平均抑製率達85.43%.結論:成功構建pGal-9的真覈錶達載體,證實其在CHO細胞中可以成功錶達,併抑製同種異體淋巴細胞增殖反應.
목적:구건β-반유당감결합응집소-9(Gal-9)적진핵표체재체,재CHO세포중표체,병검측기표체.방법:통과DNA중조기술화PCR방법종인외주혈단개핵세포극륭Gal-9기인,삽입진핵표체재체pcDNA3.1(+)중,통과PCR、매절급측서감정중조재체적정학성;채용지질체전염기술장중조질립pGal-9순시전염CHO세포,통과Western blot화RT-PCR방법검측Gal-9적표체,MTT법검측Gal-9대동충이체림파세포증식적영향.결과:DNA측서화매절감정증명Gal-9기인정학극륭지pcDNA3.1(+)적다극륭위점;이중조질립pGal-9순시전염CHO세포,통과Western blot화RT-PCR방법,재분자화단백수평증실Gal-9적표체,MTT법검측현시,Gal-9명현억제동충이체림파세포증식반응,평균억제솔체85.43%.결론:성공구건pGal-9적진핵표체재체,증실기재CHO세포중가이성공표체,병억제동충이체림파세포증식반응.
