色谱
色譜
색보
CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY
2011年
8期
706-711
,共6页
张曼玉%王春丽%边阳阳%程凯%卫晓鸾%叶明亮%邹汉法
張曼玉%王春麗%邊暘暘%程凱%衛曉鸞%葉明亮%鄒漢法
장만옥%왕춘려%변양양%정개%위효란%협명량%추한법
固定化金属离子亲和色谱%反相液相色谱-串联质谱%模体%激酶%肽段文库%蛋白质组学
固定化金屬離子親和色譜%反相液相色譜-串聯質譜%模體%激酶%肽段文庫%蛋白質組學
고정화금속리자친화색보%반상액상색보-천련질보%모체%격매%태단문고%단백질조학
模体是蛋白质二级结构上的一种特征序列,激酶底物通常具有一类特征性的模体,识别底物模体对鉴定激酶底物具有重要意义.为了快速鉴定激酶底物模体,将全细胞蛋白质酶解液作为肽段文库的来源,采用碱性磷酸酶去除肽段的固有磷酸化后构建了用于筛选激酶底物模体的肽段文库.该肽段文库是大最非磷酸化肽段的混合物,将此混合肽段与酪蛋白激酶2和 三磷酸腺苷作用30 min后,通过固定化金属离子亲和色谱法富集磷酸化肽段,采用反相液相色谱-串联质谱分析,成功地鉴定到472条非冗余底物肽段,包含451个非冗余磷酸化位点,并山此得到底物模体S/T-D/E-x-D/E.该法能够快速准确地筛选出激酶底物模体,对研究激酶-底物识别以及信号转导过程具有重要意义.
模體是蛋白質二級結構上的一種特徵序列,激酶底物通常具有一類特徵性的模體,識彆底物模體對鑒定激酶底物具有重要意義.為瞭快速鑒定激酶底物模體,將全細胞蛋白質酶解液作為肽段文庫的來源,採用堿性燐痠酶去除肽段的固有燐痠化後構建瞭用于篩選激酶底物模體的肽段文庫.該肽段文庫是大最非燐痠化肽段的混閤物,將此混閤肽段與酪蛋白激酶2和 三燐痠腺苷作用30 min後,通過固定化金屬離子親和色譜法富集燐痠化肽段,採用反相液相色譜-串聯質譜分析,成功地鑒定到472條非冗餘底物肽段,包含451箇非冗餘燐痠化位點,併山此得到底物模體S/T-D/E-x-D/E.該法能夠快速準確地篩選齣激酶底物模體,對研究激酶-底物識彆以及信號轉導過程具有重要意義.
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