CAJ | 학술논문

[目的]植物真菌病害灰霉病是由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)侵染引起,它在世界范围内造成了严重的经济损失.B.cinerea易对化学药剂产生抗性,寻找更多对灰霉病有特效的生物农药是目前急需解决的难题.鉴于顺丁烯二酸酐类化合物良好的生物活性,研究此类化合物对蛋白磷酸酶的抑制效果.[方法]将发酵优化后的B.cinerea菌体经超声破碎、硫酸铵分级盐析、透析浓缩、DEAE-Sepharase离子交换层析等步骤分离纯化,并以SDS-PAGE验证酶纯度.考察所得纯酶的酶学性质,研究顺丁烯二酸酐类化合物对B.cinerea蛋白磷酸酶的抑制作用.[结果]经分离纯化后,该酶SDS-PAGE为单一条带,提纯倍数达30.79倍,酶活回收率为39.26％.酶学特性研究结果表明其最适反应pH值为4.0,最适反应温度为37℃.该酶在pH值3.0～6.0,50℃以下内稳定.考察金属离子对B.cinerea蛋白磷酸酶酶活的影响,发现Mg2+、Fe2+、Ca2+、Ba2+能提高该酶活性,Zn2+、Cu2+、Mn2+对酶活有抑制作用.以p -NPP为底物的酶动力学参数Vmax和Km分别为12.71 mmol/(L·min)与12.84 mmol/L.4种顺丁烯二酸酐类化合物对B.cinerea蛋白磷酸酶的抑制作用由大到小排名为苯基马来酸酐、4,5-二氯邻苯二甲酸酐、二甲基马来酸酐、顺丁烯二酸酐.[结论]此酶分离纯化步骤少,减少了酶活损失.以纯化的蛋白磷酸酶为靶标,顺丁烯二酸酐类化合物对酶活抑制效果良好,可研究抑制灰霉病机理及作为生物源农药开发.
[목적]식물진균병해회매병시유회포도포균(Botrytis cinerea)침염인기,타재세계범위내조성료엄중적경제손실.B.cinerea역대화학약제산생항성,심조경다대회매병유특효적생물농약시목전급수해결적난제.감우순정희이산항류화합물량호적생물활성,연구차류화합물대단백린산매적억제효과.[방법]장발효우화후적B.cinerea균체경초성파쇄、류산안분급염석、투석농축、DEAE-Sepharase리자교환층석등보취분리순화,병이SDS-PAGE험증매순도.고찰소득순매적매학성질,연구순정희이산항류화합물대B.cinerea단백린산매적억제작용.[결과]경분리순화후,해매SDS-PAGE위단일조대,제순배수체30.79배,매활회수솔위39.26％.매학특성연구결과표명기최괄반응pH치위4.0,최괄반응온도위37℃.해매재pH치3.0～6.0,50℃이하내은정.고찰금속리자대B.cinerea단백린산매매활적영향,발현Mg2+、Fe2+、Ca2+、Ba2+능제고해매활성,Zn2+、Cu2+、Mn2+대매활유억제작용.이p -NPP위저물적매동역학삼수Vmax화Km분별위12.71 mmol/(L·min)여12.84 mmol/L.4충순정희이산항류화합물대B.cinerea단백린산매적억제작용유대도소배명위분기마래산항、4,5-이록린분이갑산항、이갑기마래산항、순정희이산항.[결론]차매분리순화보취소,감소료매활손실.이순화적단백린산매위파표,순정희이산항류화합물대매활억제효과량호,가연구억제회매병궤리급작위생물원농약개발.