中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2004年
5期
623-629
,共7页
黄功华%梁景耀%陈碧%刘新光%梁念慈
黃功華%樑景耀%陳碧%劉新光%樑唸慈
황공화%량경요%진벽%류신광%량념자
醛缩酶A%人蛋白激酶CK2α'亚基%酵母双杂交系统%相互作用蛋白
醛縮酶A%人蛋白激酶CK2α'亞基%酵母雙雜交繫統%相互作用蛋白
철축매A%인단백격매CK2α'아기%효모쌍잡교계통%상호작용단백
通过PCR扩增构建的重组质粒pTHCKA'获得人蛋白激酶CK2α'亚基编码区cDNA,将PstⅠ/NdeⅠ双酶切的PCR产物,连接到同样酶切的"诱饵"载体pGBKT7,构建为酵母双杂交穿梭表达质粒(BD质粒),经DNA测序确证及转染感受态酵母菌AH109以排除自主激活.从体外培养的HL-60细胞中提取总RNA,采用CLONTECH SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术,在酵母细胞中构建HL-60细胞的酵母双杂交cDNA文库,将构建的BD质粒、文库cDNA、酵母穿梭表达质粒pGADT7-Rec,共转染感受态酵母菌AH109进行酵母双杂交实验.筛选与人蛋白激酶CK2α'相互作用蛋白.筛选结果及一对一回复性实验显示,有6种与CK2α'相互作用蛋白,核酸序列分析及同源性检索表明,其中1种与醛缩酶A有高度同源性(99.6%).
通過PCR擴增構建的重組質粒pTHCKA'穫得人蛋白激酶CK2α'亞基編碼區cDNA,將PstⅠ/NdeⅠ雙酶切的PCR產物,連接到同樣酶切的"誘餌"載體pGBKT7,構建為酵母雙雜交穿梭錶達質粒(BD質粒),經DNA測序確證及轉染感受態酵母菌AH109以排除自主激活.從體外培養的HL-60細胞中提取總RNA,採用CLONTECH SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技術,在酵母細胞中構建HL-60細胞的酵母雙雜交cDNA文庫,將構建的BD質粒、文庫cDNA、酵母穿梭錶達質粒pGADT7-Rec,共轉染感受態酵母菌AH109進行酵母雙雜交實驗.篩選與人蛋白激酶CK2α'相互作用蛋白.篩選結果及一對一迴複性實驗顯示,有6種與CK2α'相互作用蛋白,覈痠序列分析及同源性檢索錶明,其中1種與醛縮酶A有高度同源性(99.6%).
통과PCR확증구건적중조질립pTHCKA'획득인단백격매CK2α'아기편마구cDNA,장PstⅠ/NdeⅠ쌍매절적PCR산물,련접도동양매절적"유이"재체pGBKT7,구건위효모쌍잡교천사표체질립(BD질립),경DNA측서학증급전염감수태효모균AH109이배제자주격활.종체외배양적HL-60세포중제취총RNA,채용CLONTECH SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)기술,재효모세포중구건HL-60세포적효모쌍잡교cDNA문고,장구건적BD질립、문고cDNA、효모천사표체질립pGADT7-Rec,공전염감수태효모균AH109진행효모쌍잡교실험.사선여인단백격매CK2α'상호작용단백.사선결과급일대일회복성실험현시,유6충여CK2α'상호작용단백,핵산서렬분석급동원성검색표명,기중1충여철축매A유고도동원성(99.6%).
