生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2006年
1期
82-86
,共5页
母敬郁%王峤%杨纯中%王恩思%王清%黄跃
母敬鬱%王嶠%楊純中%王恩思%王清%黃躍
모경욱%왕교%양순중%왕은사%왕청%황약
瑞氏木霉%黑曲霉%葡萄糖氧化酶%同源重组
瑞氏木黴%黑麯黴%葡萄糖氧化酶%同源重組
서씨목매%흑곡매%포도당양화매%동원중조
利用高表达分泌纤维素酶的真菌瑞氏木霉表达重组的黑曲霉葡萄糖氧化酶.在大肠杆菌DH5α中构建瑞氏木霉纤维素酶CBHI启动子和CBHI信号肽基因-黑曲霉葡萄糖氧化酶基因-瑞氏木霉纤维素酶CBHI终止子-构巢曲霉的甘油醛3磷酸脱氢酶启动子-大肠杆菌抗潮霉素B磷酸转移酶基因-构巢曲霉色氨酸C终止子-pUC19(命名为pCBHGOD)质粒,线性化后用瑞氏木霉纤维素酶CBHI启动子和CBHI信号肽基因-黑曲霉葡萄糖氧化酶基因-瑞氏木霉纤维素酶CBHI终止子-构巢曲霉的甘油醛3磷酸脱氢酶启动子-大肠杆菌抗潮霉素B磷酸转移酶基因-构巢曲霉色氨酸C终止子(命名为CBHGOD)核酸片段转化瑞氏木霉QM9414原生质体.用PCR扩增方法筛选出同源重组葡萄糖氧化酶基因的瑞士木霉突变株.用麦杆诱导瑞氏木霉突变株,生产黑曲霉葡萄糖氧化酶,Western blot分析重组的葡萄糖氧化酶分子量与Sigma公司的天然黑曲霉葡萄糖氧化酶一致,生产的重组酶活性25u/mL,相当于Sigma公司葡萄糖氧化酶标准品的产量为O.5g/L.瑞氏木霉可用于生产黑曲霉葡萄糖氧化酶.
利用高錶達分泌纖維素酶的真菌瑞氏木黴錶達重組的黑麯黴葡萄糖氧化酶.在大腸桿菌DH5α中構建瑞氏木黴纖維素酶CBHI啟動子和CBHI信號肽基因-黑麯黴葡萄糖氧化酶基因-瑞氏木黴纖維素酶CBHI終止子-構巢麯黴的甘油醛3燐痠脫氫酶啟動子-大腸桿菌抗潮黴素B燐痠轉移酶基因-構巢麯黴色氨痠C終止子-pUC19(命名為pCBHGOD)質粒,線性化後用瑞氏木黴纖維素酶CBHI啟動子和CBHI信號肽基因-黑麯黴葡萄糖氧化酶基因-瑞氏木黴纖維素酶CBHI終止子-構巢麯黴的甘油醛3燐痠脫氫酶啟動子-大腸桿菌抗潮黴素B燐痠轉移酶基因-構巢麯黴色氨痠C終止子(命名為CBHGOD)覈痠片段轉化瑞氏木黴QM9414原生質體.用PCR擴增方法篩選齣同源重組葡萄糖氧化酶基因的瑞士木黴突變株.用麥桿誘導瑞氏木黴突變株,生產黑麯黴葡萄糖氧化酶,Western blot分析重組的葡萄糖氧化酶分子量與Sigma公司的天然黑麯黴葡萄糖氧化酶一緻,生產的重組酶活性25u/mL,相噹于Sigma公司葡萄糖氧化酶標準品的產量為O.5g/L.瑞氏木黴可用于生產黑麯黴葡萄糖氧化酶.
이용고표체분비섬유소매적진균서씨목매표체중조적흑곡매포도당양화매.재대장간균DH5α중구건서씨목매섬유소매CBHI계동자화CBHI신호태기인-흑곡매포도당양화매기인-서씨목매섬유소매CBHI종지자-구소곡매적감유철3린산탈경매계동자-대장간균항조매소B린산전이매기인-구소곡매색안산C종지자-pUC19(명명위pCBHGOD)질립,선성화후용서씨목매섬유소매CBHI계동자화CBHI신호태기인-흑곡매포도당양화매기인-서씨목매섬유소매CBHI종지자-구소곡매적감유철3린산탈경매계동자-대장간균항조매소B린산전이매기인-구소곡매색안산C종지자(명명위CBHGOD)핵산편단전화서씨목매QM9414원생질체.용PCR확증방법사선출동원중조포도당양화매기인적서사목매돌변주.용맥간유도서씨목매돌변주,생산흑곡매포도당양화매,Western blot분석중조적포도당양화매분자량여Sigma공사적천연흑곡매포도당양화매일치,생산적중조매활성25u/mL,상당우Sigma공사포도당양화매표준품적산량위O.5g/L.서씨목매가용우생산흑곡매포도당양화매.
