华中医学杂志
華中醫學雜誌
화중의학잡지
CENTRAL CHINA MEDICAL JOURNAL
2006年
3期
217-218,240
,共3页
熊文化%陈安民%郭风劲%张衣北%黄涛
熊文化%陳安民%郭風勁%張衣北%黃濤
웅문화%진안민%곽풍경%장의북%황도
PIN1%异构酶%反义基因%真核表达载体
PIN1%異構酶%反義基因%真覈錶達載體
PIN1%이구매%반의기인%진핵표체재체
目的克隆正、反义人PIN1基因(hPIN1)及构建hPIN1基因正、反义真核表达载体.方法应用RT-PCR技术从人骨肉瘤细胞系MG-63细胞总RNA中成功扩增出990bp包含hPIN1基因编码区的cDNA序列,按正、反方向加上BamHⅠ及 HindⅢ双酶切位点后形成正、反义hPIN1基因,然后连入含BamHⅠ及 HindⅢ双酶切位点的pIRES2-EGFP表达质粒上,构建正、反义hPIN1基因的重组真核表达质粒phPIN1.结果扩增的cDNA经测秩序与基因文库完全一致;BamHⅠ及HindⅢ双酶切后,正、反义表达质粒形成5.3 +0.99kb 两条带,与理论计算值完全一致.结论成功克隆正、反义人PIN1基因及构建hPIN1基因的正、反义真核表达载体.
目的剋隆正、反義人PIN1基因(hPIN1)及構建hPIN1基因正、反義真覈錶達載體.方法應用RT-PCR技術從人骨肉瘤細胞繫MG-63細胞總RNA中成功擴增齣990bp包含hPIN1基因編碼區的cDNA序列,按正、反方嚮加上BamHⅠ及 HindⅢ雙酶切位點後形成正、反義hPIN1基因,然後連入含BamHⅠ及 HindⅢ雙酶切位點的pIRES2-EGFP錶達質粒上,構建正、反義hPIN1基因的重組真覈錶達質粒phPIN1.結果擴增的cDNA經測秩序與基因文庫完全一緻;BamHⅠ及HindⅢ雙酶切後,正、反義錶達質粒形成5.3 +0.99kb 兩條帶,與理論計算值完全一緻.結論成功剋隆正、反義人PIN1基因及構建hPIN1基因的正、反義真覈錶達載體.
목적극륭정、반의인PIN1기인(hPIN1)급구건hPIN1기인정、반의진핵표체재체.방법응용RT-PCR기술종인골육류세포계MG-63세포총RNA중성공확증출990bp포함hPIN1기인편마구적cDNA서렬,안정、반방향가상BamHⅠ급 HindⅢ쌍매절위점후형성정、반의hPIN1기인,연후련입함BamHⅠ급 HindⅢ쌍매절위점적pIRES2-EGFP표체질립상,구건정、반의hPIN1기인적중조진핵표체질립phPIN1.결과확증적cDNA경측질서여기인문고완전일치;BamHⅠ급HindⅢ쌍매절후,정、반의표체질립형성5.3 +0.99kb 량조대,여이론계산치완전일치.결론성공극륭정、반의인PIN1기인급구건hPIN1기인적정、반의진핵표체재체.
